转基因玉米LAMP检测体系的建立及应用

doi:10.7668/hbnxb.2010.04.010

华北农学报 ›› 2010, Vol. 25 ›› Issue (4): 49-52. doi: 10.7668/hbnxb.2010.04.010

所属专题： 玉米；生物技术；

转基因玉米LAMP检测体系的建立及应用

兰青阔¹, 王永¹, 赵新¹, 朱珠¹, 景海春², 程奕¹

1. 天津市农业科学院中心实验室, 天津 300381;
2. PlantPathogenInteractionsDivision RothamstedResearch AL52JQUK

收稿日期:2010-02-22 出版日期:2010-08-28
通讯作者: 程奕(1963- )，女，安徽歙县人，研究员，硕士，主要从事农产品质量检测研究。
作者简介:兰青阔(1980- ),男,河南南阳人,助理研究员,硕士,主要从事农产品安全质量分子检测技术研究.
基金资助:
科技部国际合作项目(2006DFA32380);天津市农业科学院院长基金项目(07013)

Development and Application of Loop-Mediated Isothermal Amplification for Detection of GM Maize Bt11

LAN Qing-kuo¹, WANG Yong¹, ZHAO Xin¹, ZHU Zhu¹, JING Hai-chun², CHENG Yi¹

1. Central Lab of Tianjin Academy of Agricultural Sciences, Tianjin 300381, China;
2. Plant Pathogen Interactions Division, Rothamsted Research, AL5 2JQ, UK

Received:2010-02-22 Published:2010-08-28

摘要/Abstract

摘要： 以转基因抗虫和耐除草剂玉米Bt11为研究材料,建立Bt11环状等温扩增快速检测技术方法.利用一种具有链置换活性的Bst DNA聚合酶,针对Bt11中玉米基因组与外源基因结合处序列,设计条特异引物,并对反应温度、时间、灵敏度、结果判断方法等参数进行初步探索.结果显示,LAMP检测方法最适反应温度及反应时间分别为65℃和60 min,其灵敏度为常规定性PCR的20倍.LAMP技术检测转基因玉米品系Bt11具有特异性高、快速、简便等优点,具有广阔的应用前景.

关键词: 转基因玉米, 环状等温扩增, 检测

Abstract: A rapid assay method for insect-resistant and herbicide-tolerant maize Bt11 was developed based on the loop-mediated isothermal amplification (LAMP) . The event-specific sequence was amplified by the Bst DNA polymerase and four primers which were designed according to the six regions of the unique and specific integration junction sequences between the host plant genome DNA and the integrated gene of Bt11. The reaction time，temperature， sensitivity，result-determining were optimized. The results showed that the optimum temperature and time was 63℃ and 60 min，respectively. The sensitivity of LAMP detection was 0. 0005% ，which was 20 times more sensitive than the conventional PCR. Results indicated that LAMP can provide a sensitive，specific，stable and reliable test for the detection of GM maize Bt11.

Key words: GM maize, Loop-mediated isothermal amplification (LAMP), Detection

中图分类号:

S339.3+1

兰青阔, 王永, 赵新, 朱珠, 景海春, 程奕. 转基因玉米LAMP检测体系的建立及应用[J]. 华北农学报, 2010, 25(4): 49-52. doi: 10.7668/hbnxb.2010.04.010.

LAN Qing-kuo, WANG Yong, ZHAO Xin, ZHU Zhu, JING Hai-chun, CHENG Yi. Development and Application of Loop-Mediated Isothermal Amplification for Detection of GM Maize Bt11[J]. ACTA AGRICULTURAE BOREALI-SINICA, 2010, 25(4): 49-52. doi: 10.7668/hbnxb.2010.04.010.

http://www.hbnxb.net/CN/Y2010/V25/I4/49

参考文献

[1] Costa-Font M,Gil J M,Traill W B.Consumer acceptance,valuation of and attitudes towards genetically modified food:Review andimplications for food policy[J].Food Policy,2008,33:99-111.

[2] European Commission.Regulation(EC) No.1830/2003 of the Euro-pean parliament and of the council of 22 September 2003 concerning thetraceability and labeling of genetically modified organisms and the trace-ability of food and feed products produced from genetically modifiedorganisms and amending directive 2001/18/EC[S].Official Journal of the European Union,2003:L268/24-L268/28.

[3] 肖一争,唐咏,宛煜嵩,等.利用复合PCR结合DNA芯片的方法进行快速转基因事件检测[J].中国农业科技导报,2007,9(4):101-107.

[4] 肖守斌.运用表面等离子共振(SPR)生物传感器检测转基因玉米的研究[J].玉米科学,2009,17(2):38-43.

[5] Notomi T,Okayama H,Masubuchi H,et al.Loop-mediated isother-mal amplification of DNA[J].Nucleic Acids Res,2000,28(12):E63.

[6] Shivappa R B,Savan R,Kono T,et al.Detection of spring viraemia of carp virus (SVCV) by loop-mediated isothermal amplification (LAMP) in koi carp Cyprinus carpio L[J].Fish Dis,2008,31(4):249-58.

[7] 李丹,唐庆娟,李兆杰,等.三种分子生物学方法检测牡蛎中诺如病毒的比较[J].食品科学,2009,30 (12):246-250.

[8] Pandey B D,Poudel A,Yoda T,et al.Development of an in-house loop-mediated isothermal amplification (LAMP) assay for detection of Mycobacterium tuberculosis and evaluation in sputum samples of Nepalese patients[J].J Med Microbiol,2008,57(Pt 4):439-443.

[9] 张宏伟,叶露萌,彭杨思,等.利用环介导等温扩增技术对沙门氏菌进行检测[J].食品研究与开发,2009,30(5):115-118.

[10] 王永,赵新,景海春,等.LAMP检测无乳链球菌方法的建立及应用[J].华北农学报,2009,24(5):234-238.

[11] Njiru Z K,Mikosza A S,Armstrong T,et al.Loop-Mediated Isothermal Amplification (LAMP) Method for Rapid Detection of Trypanosoma brucei rhodesiense[J].PLoS Negl Trop Dis,2008,2(1):e147.

[12] 兰青阔,王永,赵新,等.LAMP在检测转基因抗草甘膦大豆cp4-epsps基因上的应用[J].安徽农业科学.2008,36(24):10377-10378,10390.

[13] 王永,兰青阔,赵新,等.转基因作物外源转基因成分环介导等温扩增技术检测方法的建立及应用[J].中国农业科学,2009,42(4):1473-1477.

[14] Yano A,Ishimaru R,Hujikata R.Rapid and sensitive detection ofheat-labile I and heat-stable I enterotoxin genes of enterotoxigenic Escherichia coli by Loop-Mediated IsothermalAmplification[J].J Microbiol Methods,2007,68(2):414-420.

[15] Nagamine K,Watanabe K,Ohtsuka K,et al.Loop-mediated iso-thermal amplification reaction using a nondenatured template[J].Clin Chem,2001,47(9):1742-1743.

[16] Nagamine K,Hase T,Notomi T.Accelerated reaction by loop-mediated isothermal amplification using loop primers[J].Mol Cell Probes,2002,16(3):223-229.

[17] Mori Y,Kitao M,Tomita N,et al.Real-time turbidimetry of LAMP reaction for quantifying template DNA[J].J Biochem Biophys Methods,2004,59(2):145-157.

[18] Mori Y,Hirano T,Notomi T.Sequence specific visual detection of LAMP reactions by addition of cationic polymers[J].BMC Biotechnolge,2006,6:3.

选择文件类型/文献管理软件名称

选择包含的内容

转基因玉米LAMP检测体系的建立及应用

Development and Application of Loop-Mediated Isothermal Amplification for Detection of GM Maize Bt11

PDF

可视化

被引次数

摘要/Abstract

引用本文

使用本文

参考文献

相关文章 15

编辑推荐

Metrics

本文评价

[1]	王佳荣, 董瑞, 张梦宇, 高璞, 张培培, 李在峰, 刘大群. 40份CIMMYT小麦品系苗期及成株抗叶锈病基因鉴定[J]. 华北农学报, 2022, 37(2): 201-210.
[2]	金凤媚, 薛俊, 孙海波, 郝志愚. 基于小RNA技术的天津地区番茄花叶病毒分子检测与基因组部分序列分析[J]. 华北农学报, 2021, 36(5): 176-183.
[3]	岳润清, 刘璐, 铁双贵, 徐心志, 陈娜娜. *转Cry1Ab-t基因玉米YA108的获得及其抗虫性鉴定*[J]. 华北农学报, 2021, 36(2): 212-218.
[4]	孟雅宁, 严立斌, 张红肖, 赵海涛, 范妍芹. 辣椒抗疫病基因分子标记的筛选及检测[J]. 华北农学报, 2020, 35(S1): 338-341.
[5]	程胜群, 吕文河, 高艳玲, 白艳菊, 范国权, 张威, 张抒, 邱彩玲, 申宇, 董学志, 白雅梅. 马铃薯S病毒RT-qPCR通用检测体系的建立与应用[J]. 华北农学报, 2020, 35(6): 187-194.
[6]	金凤媚, 宋建, 薛俊, 陈东亮, 王姝, 张越, 孙海波. 北京地区侵染菊花的番茄斑萎病毒分子检测与基因组部分序列分析[J]. 华北农学报, 2020, 35(1): 175-184.
[7]	陈利达, 石延霞, 谢学文, 曹金强, 柴阿丽, 李宝聚. 我国不同地区番茄主要病毒病种类的分子检测与分析[J]. 华北农学报, 2020, 35(1): 185-193.
[8]	李欣, 崔秀明, 刘迪秋, 孙恬, 郭爱玲, 陈军. 三七根腐病菌尖孢镰刀菌的Real-time PCR检测方法[J]. 华北农学报, 2019, 34(S1): 324-330.
[9]	张敬敬, 张海英, 潘秀清, 许勇, 任毅, 高秀瑞, 李冰, 史宇凡, 党继革, 杨明珠, 武彦荣. 河北省130份西瓜品种与种质资源抗病基因KASP检测分析[J]. 华北农学报, 2019, 34(2): 110-116.
[10]	杨蕊, 韩雪纯, 李晴, 陈招荣. 天津地区梨病毒病检测方法筛选及带毒率检测[J]. 华北农学报, 2018, 33(5): 125-129.
[11]	张俊环, 孙浩元, Boris Krška, 杨丽, 姜凤超, 张美玲, 王玉柱. 杏树李痘病毒病的快速分子检测和抗PPV连锁标记的筛选[J]. 华北农学报, 2018, 33(4): 31-38.
[12]	李云富, 江敏, 宁慧宇, 张丙林, 邹华文, 吴忠义. ZmLTP3基因对玉米的遗传转化及耐盐性鉴定[J]. 华北农学报, 2018, 33(3): 1-6.
[13]	任世龙, 杨振立, 白辉, 王永芳, 全建章, 董志平, 李志勇, 邢继红. 谷瘟病菌交配型基因克隆和不同地区交配型基因检测[J]. 华北农学报, 2018, 33(3): 56-62.
[14]	王犇, 张春, 李向龙, 张中保, 邹华文, 吴忠义. *利用微滴式数字PCR技术分析转基因玉米抗除草剂标记基因EPSP拷贝数*[J]. 华北农学报, 2017, 32(3): 70-76.
[15]	胡加谊, 罗志文, 何凡, 李向宏, 胡福初, 范鸿雁, 刘志昕, 张治礼. *同步检测PMWaV-1、PMWaV-2和PMWaV-3的三重RT-qPCR方法的初步建立*[J]. 华北农学报, 2017, 32(2): 38-44.

模态框（Modal）标题

选择文件类型/文献管理软件名称

选择包含的内容

转基因玉米LAMP检测体系的建立及应用

Development and Application of Loop-Mediated Isothermal Amplification for Detection of GM Maize Bt11

PDF

可视化

被引次数

摘要/Abstract

引用本文

使用本文

参考文献

相关文章 15

编辑推荐

Metrics

本文评价