大丽轮枝菌酵母双杂交cDNA文库的构建

doi:10.7668/hbnxb.2015.02.010

华北农学报 ›› 2015, Vol. 30 ›› Issue (2): 51-54. doi: 10.7668/hbnxb.2015.02.010

大丽轮枝菌酵母双杂交cDNA文库的构建

康静敏^1,2, 刘坤², 刘严^1,2, 张怡², 李成伟², 谭光轩²

1. 郑州大学生命科学院, 河南郑州 450001;
2. 周口师范学院植物遗传与分子育种重点实验室, 河南周口 466001

收稿日期:2015-02-23 出版日期:2015-04-28
作者简介:康静敏(1988-),女,河南焦作人,硕士,主要从事植物与病菌互作研究。
基金资助:
国家自然科学基金项目(31440076;31272168)

Construction of Yeast Two-hybrid cDNA Library of Verticillium dahliae

KANG Jing-min^1,2, LIU Kun², LIU Yan^1,2, ZHANG Yi², LI Cheng-wei², TAN Guang-xuan²

1. School of Life Sciences, Zhengzhou University, Zhengzhou 450001, China;
2. Key Laboratory of Plant Genetics and Molecular Breeding, Zhoukou Normal University, Zhoukou 466001, China

Received:2015-02-23 Published:2015-04-28

摘要/Abstract

摘要： 为了分离克隆与植物互作的大丽轮枝菌致病相关蛋白基因,利用 SMART 技术构建了大丽轮枝菌酵母双杂交 cDNA 文库。结果表明,构建的文库滴度为 5.2×10⁷ cfu/mL,库容为 3.9×10⁷cfu;文库 cDNA 插入片段长度主要分布在 0.5~2.0 kb,平均为1 kb;文库重组率为 96%。表明文库质量较好,为筛选与植物互作的大丽轮枝菌致病蛋白基因奠定了基础。

关键词: 黄萎病, 大丽轮枝菌, 酵母双杂交文库, SMART 技术

Abstract: To seek out the V.dahliae proteins involved in the interaction of plant with V.dahliae, a yeast two-hybrid library of V.dahliae was constructed using SMART technique.Results showed that the titer of cDNA library was 5.2×10⁷ cfu/mL, the library contained 3.9×10⁷ cfu independent clones, the size distribution of insert fragments ranged from 0.5-2.0 kb, and the recombination rate was about 96%.These data demonstrated that the library could meet the requirements of standard cDNA library, which laid a foundation for screening the interaction proteins from V.dahliae.

Key words: Verticillium wilt, Verticillium dahliae Kleb., Yeast two-hybrid cDNA library, SMART technique

中图分类号:

S432.1
Q78

康静敏, 刘坤, 刘严, 张怡, 李成伟, 谭光轩. 大丽轮枝菌酵母双杂交cDNA文库的构建[J]. 华北农学报, 2015, 30(2): 51-54. doi: 10.7668/hbnxb.2015.02.010.

KANG Jing-min, LIU Kun, LIU Yan, ZHANG Yi, LI Cheng-wei, TAN Guang-xuan. Construction of Yeast Two-hybrid cDNA Library of Verticillium dahliae[J]. ACTA AGRICULTURAE BOREALI-SINICA, 2015, 30(2): 51-54. doi: 10.7668/hbnxb.2015.02.010.

http://www.hbnxb.net/CN/Y2015/V30/I2/51

参考文献

[1] Fradin E F,Zhang Z,Ayala J C J,et al.Genetic dissection of Verticillium wilt resistance mediated by tomato Ve1 [J].Plant Physiology,2009,150(1):320-332.
[2] Fradin E F,Abd-El-Haliem A,Masini L,et al.Interfamily transfer of tomato Ve1 mediates Verticillium resistance in Arabidopsis [J].Plant Physiology,2011,156(4):2255-2265.
[3] Mohan R,Kolattukudy P E.Differential activation of expression of a suberization-associated anionic peroxidase gene in near-isogenic resistant and susceptible tomato lines by elicitors of Verticillium albo-atrum [J].Plant Physiol,1990,92:276-280.
[4] Church V J,McCartney H A.Occurrence of Verticillium dahliae on sunflower (Helianthus annus) in the UK [J].Annals of Applied Biology,1995,127(1):49-56.
[5] Berlanger I,Powelson M L. Verticillium wilt[EB/OL].The Plant Health Instructor,2000,DOI:10.1094/PHI-I-2000-0801-01.http://www.apsnet.org/edcenter/intropp/lessons/fungi/ascomycetes/Pages/VerticilliumWilt.aspx.
[6] Yadeta K A,Thomma B P H J.The xylem as battleground for plant hosts and vascular wilt pathogens [J].Frontiers in Plant Science,2013,4:1-12.
[7] 王孝坤,王春燕,谢成建,等.黄萎病菌致病及植物抗黄萎病分子机制研究进展[J].河南农业科学,2014,43(1):1-6.
[8] 谷素静,汪敏,桑茜,等.棉花黄萎病菌T-DNA插入突变体库的构建及致病缺陷突变体筛选[J].河南农业科学,2014,43(1):69-73,83.
[9] Kawchuk L M,Hachey J,Lynch D R, et al.Tomato Ve disease resistance genes encode cell surface-like receptors [J].Proceedings of the National Academy of Sciences,2001,98(11):6511-6515.
[10] Gubler H,Hoffman B J.A simple and very efficient method for generating cDNA library [J].Gene,2003,25(2-3):263-269.
[11] 张震,王教瑜,杜新法,等.稻曲病菌cDNA文库的构建 [J].植物病理学报,2008,38(5):462-467.
[12] Chenchik A,Moqadam F,Siehert P.A new method for full-length cDNA cloning by PCR [M]//Krieg P A.A laboratory Guide to RNA:Isolation,analysis,and synthesis.New York:Wiley Liss,1996:273-321.
[13] Schuler G D.Pieces of the puzzle expressed sequence tags and the catalog of human genes [J].Mol Med,1997,75:694-698.
[14] Sugahara Y,Carninci P,Itoh M,et al.Comparative evaluation of 5-end-sequence quality of clones in CAP trapper and other full-length cDNA libraries [J].Gene,2001,63:93-102.
[15] 王晨,王文艳,初建青,等.夏黑葡萄花及果实全长 cDNA 文库的构建及鉴定 [J].华北农学报,2010,25(4):30-34.
[16] 林剑青,王成成,肖春华,等.一种用于黄曲霉高质量总 RNA 提取方法与应用 [J].中山大学学报:自然科学版,2012,51(6):107-111.
[17] Klosterman S J,Subbarao K V,Kang S,et al.Comparative genomics yields insights into niche adaptation of plant vascular wilt pathogens [J].PLoS Pathogens,2011,7(7):e1002137.
[18] Pantou M P,Typas M A.Electrophoretic karyotype and gene mapping of the vascular wilt fungus Verticillium dahliae [J].FEMS Microbiology Letters,2005,245(2):213-220.
[19] Pantou M P,Kouvelis V N,Typas M A.The complete mitochondrial genome of the vascular wilt fungus Verticillium dahliae :a novel gene order for Verticillium and a diagnostic tool for species identification [J].Current Genetics,2006,50(2):125-136.

选择文件类型/文献管理软件名称

选择包含的内容

大丽轮枝菌酵母双杂交cDNA文库的构建

Construction of Yeast Two-hybrid cDNA Library of Verticillium dahliae

PDF

可视化

被引次数

摘要/Abstract

引用本文

使用本文

参考文献

相关文章 15

编辑推荐

Metrics

本文评价

[1]	胡雨莹, 孙茂, 汪骞, 黎志彬, 鲍锐, 桂敏, 钟秋月, 杜光辉, 吴丽艳. *野生蒜芥茄SsRPM1基因的生信分析、亚细胞定位及表达分析*[J]. 华北农学报, 2025, 40(3): 27-33.
[2]	杨剑锋, 李铁, 杨旭, 王月胜, 宋雪峰, 单昱林, 党媛玥, 张键, 赵君. 生物有机肥对向日葵黄萎病室内防效研究[J]. 华北农学报, 2025, 40(2): 181-190.
[3]	贾鑫宇, 东保柱, 杨继峰, 周洪友. *大丽轮枝菌转录因子VDAG_04814基因功能探究*[J]. 华北农学报, 2024, 39(6): 202-209.
[4]	郑鑫鑫, 张艳, 解美霞, 张冬梅, 吴立强, 王省芬, 杨君. *陆地棉抗黄萎病基因GhENODL6互作蛋白筛选*[J]. 华北农学报, 2024, 39(3): 173-178.
[5]	冯伊彤, 贾硕, 刘麟, 杨剑锋, 杜磊, 张文兵, 石胜华, 武占敏, 张键, 赵君. 外源添加铁离子对向日葵大丽轮枝菌生物学特性及致病力的影响[J]. 华北农学报, 2024, 39(2): 161-167.
[6]	蔚亚楠, 黎志彬, 龚亚菊, 鲍锐, 桂敏, 杜光辉, 刘家迅, 吴丽艳. 大理野茄M239响应黄萎病病菌侵染的差异表达蛋白分析[J]. 华北农学报, 2024, 39(1): 165-174.
[7]	陆承哲, 贾培, 武盼, 唐叶, 石琳芳, 陈爱民, 彭清忠, 吴家和. *陆地棉SKS基因家族全基因组特征分析与GhSKS13抗黄萎病功能解析*[J]. 华北农学报, 2023, 38(6): 156-167.
[8]	曾焱明, 胡广, 贾培, 唐叶, 王炳婷, 武盼, 陆承哲, 陈爱民, 彭清忠, 吴家和. *棉花WRKY7基因克隆及其对黄萎病抗性分析*[J]. 华北农学报, 2022, 37(6): 191-200.
[9]	胡子曜, 李秀青, 代培红, 雷建峰, 柳建飞, 赵燚, 邓嘉辉, 刘超, 刘晓东, 李月. *陆地棉细胞色素P450基因GhP450-94C1黄萎病抗性功能验证*[J]. 华北农学报, 2022, 37(6): 72-81.
[10]	张键, 曹雄, 杨剑锋, 贾硕, 刘麟, 阿德拉·曼德拉-俄罗摩, 冯伊彤, 赵君. 活性氧及抗病信号分子介导的向日葵抗黄萎病机制初探[J]. 华北农学报, 2022, 37(3): 193-199.
[11]	李丹, 赵存鹏, 刘素恩, 王凯辉, 王兆晓, 刘旭, 郭宝生, 耿军义. 黄萎病菌胁迫下陆地棉冀2658根部蛋白质组研究[J]. 华北农学报, 2020, 35(S1): 322-331.
[12]	刘建芬, 雷煜, 张振楠, 胡广, 唐叶, 张宁, 司怀军, 吴家和. GhWRKY48负调控棉花对大丽轮枝菌的抗性[J]. 华北农学报, 2019, 34(5): 99-105.
[13]	雷煜, 张振楠, 胡广, 刘建芬, 唐叶, 张宁, 司怀军, 吴家和. *棉花WRKY22基因分离及其对黄萎病的抗性分析*[J]. 华北农学报, 2018, 33(6): 160-168.
[14]	张素君, 唐丽媛, 李兴河, 王海涛, 刘存敬, 张香云, 张建宏. SSR标记与陆地棉田间黄萎病抗性的关联分析[J]. 华北农学报, 2018, 33(6): 152-159.
[15]	范强, 王乐, 谢彩玲, 张宁, 司怀军, 吴家和. *棉花冠菌素不敏感因子GhCOI1基因分离和对大丽轮枝菌的抗性分析*[J]. 华北农学报, 2017, 32(1): 29-35.

模态框（Modal）标题

选择文件类型/文献管理软件名称

选择包含的内容

大丽轮枝菌酵母双杂交cDNA文库的构建

Construction of Yeast Two-hybrid cDNA Library of Verticillium dahliae

PDF

可视化

被引次数

摘要/Abstract

引用本文

使用本文

参考文献

相关文章 15

编辑推荐

Metrics

本文评价