谷子种子带线虫检测体系的建立及应用

doi:10.7668/hbnxb.20194844

华北农学报 ›› 2025, Vol. 40 ›› Issue (S1): 248-255. doi: 10.7668/hbnxb.20194844

所属专题： 杂粮作物；植物保护；

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谷子种子带线虫检测体系的建立及应用

张梦雅¹, 龚珂珂¹^,², 董志平¹, 刘佳¹, 马继芳¹, 王永芳¹, 刘磊¹, 全建章¹, 李志勇¹, 白辉¹

¹ 河北省农林科学院谷子研究所,农业农村部特色杂粮遗传改良与利用重点实验室(省部共建),河北省杂粮研究重点实验室,河北石家庄 050035
² 河南科技大学农学院,河南洛阳 471023

收稿日期:2024-10-16 出版日期:2025-12-29
通讯作者:
李志勇(1976-),男,河北邯郸人,研究员,博士,主要从事谷子病害研究。
白辉(1980-),女,河北石家庄人,研究员,博士,主要从事谷子抗病分子生物学研究。
作者简介:
张梦雅(1991-),女,河北辛集人,助理研究员,硕士,主要从事谷子病害研究。
张梦雅、龚珂珂为同等贡献作者。
基金资助:
河北省农林科学院基本科研业务费试点经费包干制项目(HBNKY-BGZ-02); 国家自然科学基金项目(31872880); 国家现代农业产业技术体系专项(CARS-06-14.5-A25); 河北省现代农业产业技术体系建设专项资金(HBCT2024080204)

Establishment and Application of Detection System for Millet Seed with Aphelenchoides besseyi

ZHANG Mengya¹, GONG Keke¹^,², DONG Zhiping¹, LIU Jia¹, MA Jifang¹, WANG Yongfang¹, LIU Lei¹, QUAN Jianzhang¹, LI Zhiyong¹, BAI Hui¹

¹ Institute of Millet Crops,Hebei Academy of Agriculture and Forestry Sciences,Key Laboratory of Genetic Improvement and Utilization for Featured Coarse Cereals (Co-construction by Ministry and Province),Ministry of Agriculture and Rural Affairs,Key Laboratory of Minor Cereal Crops of Hebei Province,Shijiazhuang 050035,China
² College of Agriculture,Henan University of Science and Technology,Luoyang 471023,China

Received:2024-10-16 Published:2025-12-29

摘要/Abstract

摘要：

为更好地解决谷子带线虫检测出现的假阳性问题,建立一种稳定、高效、低成本的谷子带病原线虫检测体系,以带线虫谷粒济谷20为供试材料,对医用棉纱布、粗尼龙纱布和细尼龙纱布3种介质包裹下洗脱的线虫数量进行比较;吸出单条线虫后,探究了切割、冻融、酶裂解等方法对提取单条线虫DNA的效果影响;并利用该体系对2018,2020,2021年来源不同种子公司共计109份谷子种子样品进行带线虫检测。最终确定的检测体系为:用细尼龙纱布包裹1.5 g种子浸泡4 h,混匀洗脱液后在显微镜下计数进行线虫定量,采用酶裂解法提取线虫DNA,利用贝西滑刃线虫特异性引物进行PCR扩增对谷子病原线虫定性。供检的109份谷子种子样本共检测出4份带线虫种子,每1.5 g带线虫量均为5条,病原线虫经分子鉴定为贝西滑刃线虫。先定量再定性的线虫检测体系可用于大批量谷子种子带线虫样本的快速检测,为谷子线虫病的早期诊断和监测防控提供技术支持。

关键词: 谷子线虫病, 贝西滑刃线虫, DNA提取, 特异性PCR, 快速检测

Abstract:

In order to better solve the problem of false positive in the detection of Aphelenchoides besseyi Christie and establish a stable,efficient and low cost detection system for millet seed of parasitic nematodes,using millet seed of nematodes Jigu 20 as experimental materials,the number of nematode eluted by medical cotton gauze,coarse nylon gauze and thin nylon gauze was compared.Three effect methods of DNA extraction,namely,cutting,freeze-thaw,enzymatic lysis were designed and compared in order to check their efficiency of DNA extraction from singlenematode.A total of 109 millet seed samples from different seed companies in 2018,2020 and 2021 were detected by the system.The final detection system was as follows:1.5 g seeds were wrapped in thin nylon gauze and soaked for 4 h,then the elution was mixed and counted under microscope for nematode quantification; the single nematode DNA was extracted by enzymatic lysis and characterized by PCR amplification with specific primers.The pathogenic nematodes were molecular-identified as Aphelenchoides besseyi.A total of 4 seed samples from 109 millet seed samples with 5 nematodes per 1.5 g were detected.The system with nematode quantification and qualification can be used for rapid detection of nematodes in large quantities of millet seed,providing technical support for the early diagnosis,monitoring,and prevention and control of millet nematode disease.

Key words: Millet nematode disease, Aphelenchoides besseyi, DNA extraction, Specific PCR, Rapid diagnosis

中图分类号:

张梦雅, 龚珂珂, 董志平, 刘佳, 马继芳, 王永芳, 刘磊, 全建章, 李志勇, 白辉. 谷子种子带线虫检测体系的建立及应用[J]. 华北农学报, 2025, 40(S1): 248-255. doi: 10.7668/hbnxb.20194844.

ZHANG Mengya, GONG Keke, DONG Zhiping, LIU Jia, MA Jifang, WANG Yongfang, LIU Lei, QUAN Jianzhang, LI Zhiyong, BAI Hui. Establishment and Application of Detection System for Millet Seed with Aphelenchoides besseyi[J]. Acta Agriculturae Boreali-Sinica, 2025, 40(S1): 248-255. doi: 10.7668/hbnxb.20194844.

http://www.hbnxb.net/CN/Y2025/V40/IS1/248

图/表 7

图1 不同介质洗脱线虫效果比较 A.不同介质洗脱线虫的数量与洗脱体积;B.不同介质洗脱液杂质数量。

Fig.1 Comparison of the cleaning effect of Aphelenchoides besseyi by different elution media A.Number of Aphelenchoides besseyi and liquid volume by different elution media; B.Number of impurities by different elution media.

图2 线虫不同切割工具对线虫DNA提取效果的电泳 M.Marker;CK^-.阴性对照(ddH₂O);1.解剖刀切割2 min+冻融+酶裂解;2.塑料杵杵2 min+冻融+酶裂解;3.不切割+冻融+酶裂解;4.解剖刀切割2 min;5.塑料杵杵2 min;6.不切割。

Fig.2 Electrophoretogram of the Aphelenchoides besseyi DNA based on different cutting tools M.Marker; CK^-.Negative control(ddH₂O);1.Cutting 2 min with scalpel+freeze-thaw+enzymatic lysis;2.Cutting 2 min with plastic pestle+freeze-thaw+enzymatic lysis;3.No cutting+freeze-thaw+enzymatic lysis;4.Cutting 2 min with scalpel;5.Cutting 2 min with plastic pestle;6.No cutting.

图3 冻融+酶裂解条件下,解剖刀切割时间对线虫DNA提取效果的电泳 M.Marker;CK^-.阴性对照(ddH₂O);1.解剖刀切割2 min+冻融+酶裂解;2.解剖刀切割1 min+冻融+酶裂解;3.解剖刀切割30 s+冻融+酶裂解;4.不切割+冻融+酶裂解。

Fig.3 Electrophoretogram of the Aphelenchoides besseyi DNA based on different cutting time with scalpel under freeze-thaw and enzymatic lysis M.Marker; CK^-.Negative control(ddH₂O);1.Cutting 2 min with scalpel+freeze-thaw+enzymatic lysis;2.Cutting 1 min with scalpel+freeze-thaw+enzymatic lysis;3.Cutting 30 s with scalpel+freeze-thaw+enzymatic lysis;4.No cutting+freeze-thaw+enzymatic lysis.

图4 确定冻融与酶裂解对线虫DNA提取效果的电泳 M.Marker;CK^-.阴性对照(ddH₂O);1.解剖刀切割30 s+冻融+裂解;2.解剖刀切割30 s+冻融;3.解剖刀切割30 s+裂解;4.解剖刀切割30 s;5.不切割+冻融+裂解;6.不切割+冻融;7.不切割+裂解;8.不切割+不冻融+不酶裂解。图5同。

Fig.4 Electrophoretogram of the Aphelenchoides besseyi DNA based on freeze-thaw and enzymatic lysis M.Marker; CK^-.Negative control(ddH₂O);1.Cutting 30 s with scalpel+freeze-thaw+enzymatic lysis;2.Cutting 30 s with scalpel+freeze-thaw;3.Cutting 30 s with scalpel+enzymatic lysis;4.Cutting 30 s with scalpel;5.No cutting+freeze-thaw+enzymatic lysis;6.No cutting+freeze-thaw;7.No cutting+enzymatic lysis;8.No cutting+no freeze-thaw+no enzymatic lysis.The same as Fig.5.

图5 确定不同处理方法对线虫DNA提取效果稳定性电泳

Fig.5 Electrophoretogram of the stability of Aphelenchoides besseyi DNA based on different methods

表1 不同谷子品种线虫镜检统计

Tab.1 Statistical of Aphelenchoides besseyi of different millet varieties examinated from microscope

采集年份 Sampling year	采集省份 Sampling province	来源公司 Origin company	采集地区 Sampling site	样本类型 Sample type	样品数量 Sample size	阳性样本数量 Positive sample size	1.5 g种子带线虫量/条 Number of nematodes from 1.5 g seeds
2018	内蒙古	内蒙古蒙龙种业	松山	春谷	17	0	0
			喀喇沁旗	春谷	3	0	0
			敖汉旗	春谷	1	0	0
		巴林左旗鑫达种业有限公司	巴林左旗	春谷	3	0	0
		内蒙古禾为贵种业有限公司	敖汉旗	春谷	2	0	0
	山东	鲁岩公司	章丘	夏谷	1	0	0
	河北	东昌种业	邯郸	夏谷	9	0	0
		河北巡天农业科技有限公司	张家口	春谷	12	1	5
	山西	山西省汾都香种业科技公司	石楼县	春谷	1	0	0
			平遥县	春谷	1	0	0
			汾阳市	春谷	1	0	0
			兴县	春谷	1	0	0
2020	吉林	吉林省乾安县天丰米业有限公司	乾安县	春谷	4	0	0
		松原市金禾农业科技开发有限公司	松原	春谷	5	1	5
	内蒙古	内蒙古蒙龙种业	松山	春谷	4	0	0
		内蒙古蒙清农业科技开发有限责任公司	呼和浩特	春谷	1	0	0
		巴林左旗鑫达种业有限公司	巴林左旗	春谷	12	0	0
	河北	平泉翠芳种植专业合作社	平泉	春谷	4	0	0
		刘杖子有机专业合作社	承德县	春谷	1	0	0
		承德县熙野产销合作社		春谷	1	0	0
		承德丰宁禾林小米种植专业合作社	丰宁	春谷	2	1	5
		黄旗皇翁公司		春谷	3	0	0
2021	吉林	松原市金禾农业科技开发有限公司	松原	春谷	5	0	0
	河北	河北巡天农业科技有限公司	张家口	春谷	15	1	5

图6 阳性样本中线虫DNA GU-F/R引物的PCR分子检测 M.Marker;CK^-.阴性对照(ddH₂O);CK⁺.阳性对照(Aphelenchoides besseyi );1-4.阳性样本。

Fig.6 PCR detection of positive samples by using specific primers GU-F/R for Aphelenchoides besseyi M.Marker; CK^-.Negative control (ddH₂O); CK⁺.Positive control (Aphelenchoides besseyi ); 1-4.Positive samples.

参考文献 32

[1]	朱宏, 梁克红, 徐海泉, 仇菊, 郭燕枝, 黄家章, 朱大洲, 孙君茂. 我国农产品营养标准体系现状与发展建议[J]. 中国农业科学, 2019, 52(18):3145-3154.doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2019.18.007.
	Zhu H, Liang K H, Xu H Q, Qiu J, Guo Y Z, Huang J Z, Zhu D Z, Sun J M. Review and suggestion for nutrition standard of agricultural products in China[J]. Scientia Agricultura Sinica, 2019, 52(18):3145-3154. doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2019.18.007
[2]	李顺国, 刘斐, 刘猛, 程汝宏, 夏恩君, 刁现民. 中国谷子产业和种业发展现状与未来展望[J]. 中国农业科学, 2021, 54(3):459-470.doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2021.03.001.
	Li S G, Liu F, Liu M, Cheng R H, Xia E J, Diao X M. Current status and future prospective of foxtail millet production and seed industry in China[J]. Scientia Agricultura Sinica, 2021, 54(3):459-470. doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2021.03.001
[3]	白峰, 李建华, 张红艳. 华北夏谷区谷子线虫病发生原因及防治方法[J]. 农业科技通讯, 2016(9):233-234.doi:10.3969/j.issn.1000-6400.2016.09.090.
	Bai F, Li J H, Zhang H Y. Causes and control methods of millet nematode disease in summer valley area of North China[J]. Bulletin of Agricultural Science and Technology, 2016(9):233-234.
[4]	张丽英. 谷子线虫病的发生及防治方法[J]. 现代农村科技, 2017(2): 30.doi:10.3969/j.issn.1674-5329.2017.02.024.
	Zhang L Y. Occurrence and control methods of millet nematode disease[J]. Modern Rural Science and Technology, 2017(2):30.
[5]	陈昆圆, 文艺, 许相奎, 周博, 张红瑞, 王铁霖, 孟颢光, 蒋士君, 崔江宽. 河南省丹参根结线虫病原种类鉴定[J]. 河南农业大学学报, 2022, 56(6):998-1006.doi:10.16445/j.cnki.1000-2340.20220906.001.
	Chen K Y, Wen Y, Xu X K, Zhou B, Zhang H R, Wang T L, Meng H G, Jiang S J, Cui J K. Species identification of root-knot nematode pathogen on Salvia miltiorrhiza in Henan Province[J]. Journal of Henan Agricultural University, 2022, 56(6):998-1006.
[6]	张寅寅, 黑多尔, 刘玥婷, 李鑫. 荷兰进境百合种球中线虫的分离及分子鉴定[J]. 农业环境科学学报, 2022, 41(12):2805-2809.doi:10.11654/jaes.2022-1141.
	Zhang Y Y, Hei D E, Liu Y T, Li X. Isolation and molecular identification of nematodes intercepted from imported Netherlands' lily bulbs[J]. Journal of Agro-Environment Science, 2022, 41(12):2805-2809.
[7]	任豪豪, 陈昆圆, 周博, 焦永吉, 蒋士君, 汤继华, 崔江宽. 河南省禾谷类作物孢囊线虫的发生分布与种类鉴定[J]. 植物保护学报, 2022, 49(6):1685-1696.doi:10.13802/j.cnki.zwbhxb.2022.2021131.
	Ren H H, Chen K Y, Zhou B, Jiao Y J, Jiang S J, Tang J H, Cui J K. Occurrence and identification of cereal cyst nematodes in Henan Province of China[J]. Journal of Plant Protection, 2022, 49(6):1685-1696.
[8]	白宗师, 秦萌, 赵立荣, 韩玉春, 王东伟, 徐春玲, 谢辉. 水稻干尖线虫的环介导恒温扩增技术(LAMP)快速检测方法[J]. 中国水稻科学, 2017, 31(4):432-440.doi:10.16819/j.1001-7216.2017.7001.
	Bai Z S, Qin M, Zhao L R, Han Y C, Wang D W, Xu C L, Xie H. Loop-mediated isothermal amplification assay for rapid diagnosis of Aphelenchoides besseyi[J]. Chinese Journal of Rice Science, 2017, 31(4):432-440.
[9]	魏洪岩, 王暄, 李红梅, 孙文荣, 顾建锋. 采用环介导等温扩增法(LAMP)快速检测苹果根结线虫[J]. 植物保护学报, 2016, 43(2):260-266.doi:10.13802/j.cnki.zwbhxb.2016.02.012.
	Wei H Y, Wang X, Li H M, Sun W R, Gu J F. Loop-mediated isothermal amplification assay for rapid diagnosis of Meloidogyne mali[J]. Journal of Plant Protection, 2016, 43(2):260-266.
[10]	何晋, 刘淑婷, 陈淳, 丁善文, 谢辉, 徐春玲. 基于rDNA-ITS序列建立LAMP检测水稻潜根线虫的方法[J]. 植物病理学报, 2021, 51(4):626-635.doi:10.13926/j.cnki.apps.000538.
	He J, Liu S T, Chen C, Ding S W, Xie H, Xu C L. A loop-mediated isothermal amplification method for detection of Hirschmanniella oryzae based on rDNA-ITS sequences[J]. Acta Phytopathologica Sinica, 2021, 51(4):626-635.
[11]	崔江宽, 任豪豪, 曹梦园, 陈昆圆, 周博, 蒋士君, 汤继华. 玉米孢囊线虫SCAR-PCR快速分子检测技术[J]. 中国农业科学, 2022, 55(17):3334-3342.doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2022.17.006.
	Cui J K, Ren H H, Cao M Y, Chen K Y, Zhou B, Jiang S J, Tang J H. Scar-PCR rapid molecular detection technology of Heterodera zeae[J]. Scientia Agricultura Sinica, 2022, 55(17):3334-3342.
[12]	陈凤毛, 叶建仁, 吴小芹, 谈家金, 黄麟. 松材线虫两种实用分子检测技术[J]. 北京林业大学学报, 2011, 33(4):149-152.doi:10.13332/j.1000-1522.2011.04.012.
	Chen F M, Ye J R, Wu X Q, Tan J J, Huang L. Two kinds of applied molecular skills to detect Bursaphelenchus xylophilus[J]. Journal of Beijing Forestry University, 2011, 33(4):149-152.
[13]	宋志强, 王暄, 林宇, 迟元凯, 鞠玉亮, 李红梅. 土壤中南方根结线虫的实时荧光PCR检测和定量[J]. 植物保护学报, 2013, 40(3):255-260.doi:10.13802/j.cnki.zwbhxb.2013.03.010.
	Song Z Q, Wang X, Lin Y, Chi Y K, Ju Y L, Li H M. Detection and quantification of Meloidogyne incognita in soil sample using Real-time PCR[J]. Journal of Plant Protection, 2013, 40(3):255-260.
[14]	林宇, 鞠玉亮, 刘娟, 王金成, 高建, 郑春生, 魏亚东, 黄国明. 菊花滑刃线虫RPA检测方法研究[J]. 湖南农业科学, 2021(1):1-3,10.doi:10.16498/j.cnki.hnnykx.2021.001.001.
	Lin Y, Ju Y L, Liu J, Wang J C, Gao J, Zheng C S, Wei Y D, Huang G M. Development of RPA assay for detection of Aphelenchoides ritzemabosi[J]. Hunan Agricultural Sciences, 2021(1):1-3,10.
[15]	高波, 马娟, 李秀花, 王容燕, 陈书龙. 马铃薯腐烂茎线虫RPA-LFD可视化快速检测方法的建立[J]. 植物病理学报, 2022, 52(6):984-992.doi:10.13926/j.cnki.apps.000613.
	Gao B, Ma J, Li X H, Wang R Y, Chen S L. Development of RPA-LFD visualization assay for rapid detection of Ditylenchus destructor[J]. Acta Phytopathologica Sinica, 2022, 52(6):984-992.
[16]	Iwahori H, Tsuda K, Kanzaki N, Izui K, Futai K. PCR-RFLP and sequencing analysis of ribosomal DNA of Bursaphelenchus nematodes related to pine wilt disease[J]. Fundamental and Applied Nematology, 1998, 21(6):655-666.
[17]	Sato E, Min Y Y, Shirakashi T, Wada S, Toyota K. Detection of the root-lesion nematode,Pratylenchus penetrans (Cobb),in a nematode community using Real-time PCR[J]. Japanese Journal of Nematology, 2007, 37(2):87-92.doi:10.3725/jjn.37.87.
[18]	思彬彬, 张靠稳, 孟北乾. 雌根结线虫DNA的提取方法[J]. 江苏农业科学, 2013, 41(6):27-28.doi:10.15889/j.issn.1002-1302.2013.06.083.
	Si B B, Zhang K W, Meng B Q. Extraction method of DNA from female root-knot nematodes[J]. Jiangsu Agricultural Sciences, 2013, 41(6):27-28.
[19]	Subbotin S A, Ragsdale E J, Mullens T, Roberts P A, Mundo-Ocampo M, Baldwin J G. A phylogenetic framework for root lesion nematodes of the genus Pratylenchus(Nematoda):evidence from 18S and D2-D3 expansion segments of 28S ribosomal RNA genes and morphological characters[J]. Molecular Phylogenetics and Evolution, 2008, 48(2):491-505.doi:10.1016/j.ympev.2008.04.028. pmid: 18514550
[20]	王江岭, 张建成, 顾建锋. 单条线虫DNA提取方法[J]. 植物检疫, 2011, 25(2):32-35.doi:10.19662/j.cnki.issn1005-2755.2011.02.009.
	Wang J L, Zhang J C, Gu J F. Method of extract DNA from a single nematode[J]. Plant Quarantine, 2011, 25(2):32-35.
[21]	王金成, 余本渊, 林茂松. 木质包装材料中线虫一新种(线虫门,滑刃科)记述[J]. 动物分类学报, 2005, 30(2):314-319.doi:10.3969/j.issn.1000-0739.2005.02.016.
	Wang J C, Yu B Y, Lin M S. Description of a new species (Nematoda,Aphelenchoididae) isolated from wood packaging material[J]. Acta Zootaxonomica Sinica, 2005, 30(2):314-319.
[22]	Kumari S, Kundu J K, Polák J. Identification of Xiphinema vuittenezi by polymerase chain reaction[J]. Plant Protection Science, 2004, 40(1):1-4.doi:10.17221/3120-pps. URL
[23]	苟大平, 王曦茁, 汪来发, 田国忠, 朱天辉, 郭民伟. 一种适于PCR和LAMP检测的松木中松材线虫DNA快速提取方法[J]. 林业科学, 2015, 51(6):100-110.doi:10.11707/j.1001-7488.20150612.
	Gou D P, Wang X Z, Wang L F, Tian G Z, Zhu T H, Guo M W. A method for rapidly extracting DNA of Bursaphelenchus xylophilus from the infested pine wood for PCR and LAMP detection[J]. Scientia Silvae Sinicae, 2015, 51(6):100-110.
[24]	Sayed Abdul Rahman S A, Mohamed Z, Othman R Y, Swennen R, Panis B, De Waele D, Remy S, Carpentier S C. In planta PCR-based detection of early infection of plant-parasitic nematodes in the roots:a step towards the understanding of infection and plant defence[J]. European Journal of Plant Pathology, 2010, 128(3):343-351.doi:10.1007/s10658-010-9656-3. URL
[25]	Peng H, Peng D L, Hu X Q, He X F, Wang Q, Huang W K, He W T. Loop-mediated isothermal amplification for rapid and precise detection of the burrowing nematode,Radopholus similis,directly from diseased plant tissues[J]. Nematology, 2012, 14(8):977-986.doi:10.1163/156854112x638415. URL
[26]	陈善铭, 陈品三, 郑家兰, 李丽丽, 魏嘉典. 粟线虫病病原线虫生活史的研究[J]. 植物保护学报, 1962(1):15-24.
	Chen S M, Chen P S, Zheng J L, Li L L, Wei J D. Study on the life history of the pathogenic nematode of millet nematode[J]. Journal of Plant Protection, 1962(1):15-24.
[27]	王金成, 林宇, 顾建锋, 董立, 郭京泽, 陈先锋, 李志勇. 河北省谷子线虫病的病原鉴定[J]. 华北农学报, 2015, 30(6):176-181.doi:10.7668/hbnxb.2015.06.027.
	Wang J C, Lin Y, Gu J F, Dong L, Guo J Z, Chen X F, Li Z Y. Identification of pathogenic nematode isolated from foxtail millet in Hebei Province[J]. Acta Agriculturae Boreali-Sinica, 2015, 30(6):176-181.
[28]	宋振君, 李志勇, 王永芳, 全建章, 马继芳, 白辉, 董志平. 谷子种子线虫检测及分析[J]. 华北农学报, 2019, 34(4):208-216.doi:10.7668/hbnxb.201751613.
	Song Z J, Li Z Y, Wang Y F, Quan J Z, Ma J F, Bai H, Dong Z P. Detection and analysis of millet seeds with Aphelenchoides besseyi[J]. Acta Agriculturae Boreali-Sinica, 2019, 34(4):208-216.
[29]	容万韬, 王金成, 刘鹏, 林宇, 郭京泽, 黄国明, 孙建华. 单条线虫DNA提取方法研究[J]. 华北农学报, 2014, 29(2):127-132.doi:10.3969/j.issn.1000-7091.2014.02.024.
	Rong W T, Wang J C, Liu P, Lin Y, Guo J Z, Huang G M, Sun J H. Research on DNA extraction methods from a single nematode[J]. Acta Agriculturae Boreali-Sinica, 2014, 29(2):127-132. doi: 10.7668/hbnxb.2014.02.024
[30]	王嘉宝, 孟元, 史明易, 刘美琪, 贾美清, 张国刚. 短花针茅荒漠草原单条土壤线虫分子鉴定方法研究[J]. 天津农业科学, 2020, 26(2):77-84.doi:10.3969/j.issn.1006-6500.2020.02.017.
	Wang J B, Meng Y, Shi M Y, Liu M Q, Jia M Q, Zhang G G. Molecular identification of soil nematodes in Stipa breviflora desert steppe[J]. Tianjin Agricultural Sciences, 2020, 26(2):77-84.
[31]	练云, 冯文强, 雷晨芳, 李金英, 武永康, 王庭峰, 陆莉莉, 卢为国. 一种从大豆胞囊线虫中快速提取DNA的方法[J]. 大豆科学, 2016, 35(6):1043-1046.doi:10.11861/j.issn.1000-9841.2016.06.1043.
	Lian Y, Feng W Q, Lei C F, Li J Y, Wu Y K, Wang T F, Lu L L, Lu W G. A method for rapid extraction of DNA from soybean cyst nematode[J]. Soybean Science, 2016, 35(6):1043-1046.
[32]	普国庆, 罗丹, 赵成法, 谭坤, 刘硕然, 肖文, 李延鹏. 基于贝尔曼漏斗法的土壤线虫最优分离时长探究[J]. 大理大学学报, 2021, 6(12):87-90.doi:10.3969/j.issn.2096-2266.2021.12.017.
	Pu G Q, Luo D, Zhao C F, Tan K, Liu S R, Xiao W, Li Y P. Study on optimal extraction duration of soil-nematode based on baermann funnel method[J]. Journal of Dali University, 2021, 6(12):87-90.

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[2]	张强, 张涛, 常晓轲, 韩娅楠, 程志芳, 刘卫, 王彬, 姚秋菊. 一个辣椒胞质雄性不育SCAR标记的KASP转化及其应用[J]. 华北农学报, 2019, 34(5): 93-98.
[3]	宋振君, 李志勇, 王永芳, 全建章, 马继芳, 白辉, 董志平. 谷子种子线虫检测及分析[J]. 华北农学报, 2019, 34(4): 208-216.
[4]	王金成, 林宇, 顾建锋, 董立, 郭京泽, 陈先锋, 李志勇. 河北省谷子线虫病的病原鉴定[J]. 华北农学报, 2015, 30(6): 176-181.
[5]	冉策, 陈柳, 陆家兰, 刘正坪, 魏艳敏, 赵晓燕, 尚巧霞. 三种DNA提取方法对检测草莓镶脉病毒稳定性的研究[J]. 华北农学报, 2015, 30(3): 200-204.
[6]	田晓燕, 张庆萍, 王燕春, 席先梅, 白海. 内蒙古地区番茄溃疡病菌PCR快速检测技术及22个番茄品种种子表面带菌检测[J]. 华北农学报, 2015, 30(1): 150-153.
[7]	容万韬, 王金成, 刘鹏, 林宇, 郭京泽, 黄国明, 孙建华. 单条线虫DNA提取方法研究[J]. 华北农学报, 2014, 29(2): 127-132.
[8]	王仕玉, 郭凤根, 刘芸君, 刘云芬, 杨生超, 张应华. 云南岩白菜资源的DNA提取和ISSR引物筛选[J]. 华北农学报, 2012, 27(S1): 24-26.
[9]	周索童, 刘志文. 水稻不同组织总DNA对叶绿体标记分析的影响[J]. 华北农学报, 2010, 25(S2): 27-30.
[10]	杨清, 苏光荣, 韩蕾, 王正良, 孙启祥, 彭镇华. 版纳甜龙竹DNA提取方法及AFLP反应体系建立研究[J]. 华北农学报, 2010, 25(S1): 32-37.
[11]	刘庆堂, 职爱民, 邓瑞广, 杨艳艳, 杨继飞, 柴书军, 张改平. 链霉素金标单克隆抗体快速检测试纸的研制及其特性鉴定[J]. 华北农学报, 2010, 25(5): 85-89.
[12]	张永生, 赖欣, 张静妮, 李刚, 赵帅, 杨殿林. 内蒙古贝加尔针茅草原细菌多样性的PCR-DGGE分析[J]. 华北农学报, 2010, 25(3): 58-63.
[13]	罗秋婷, 钟君, 满玉萍, 郭旭英, 严海燕. 不同因素对花生总DNA提取的影响[J]. 华北农学报, 2009, 24(S2): 16-19.
[14]	刘宣兵, 张改平, 王斌, 滕曼, 邓瑞广, 侯玉泽, 邢广旭, 杨继飞. 磺胺甲噁唑残留检测阻断ELISA试剂盒的研制[J]. 华北农学报, 2009, 24(2): 214-217.
[15]	张鲁杰, 夏秀英, 徐娜, 贺建华, 徐品三. 高效提取越橘成熟组织基因组DNA的方法[J]. 华北农学报, 2008, 23(S2): 205-208.

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