DT40细胞slgM λ轻链基因敲除载体的构建

doi:10.7668/hbnxb.2009.03.001

华北农学报 ›› 2009, Vol. 24 ›› Issue (3): 1-6. doi: 10.7668/hbnxb.2009.03.001

所属专题： 生物技术；

• 论文 • 下一篇

DT40细胞slgM λ轻链基因敲除载体的构建

游雷鸣^1,2, 罗俊¹, 王爱萍², 张改平¹, 卜丹², 郭亚男², 祈艳华²

1. 河南省农业科学院, 河南省动物免疫学重点实验室, 河南郑州 450002;
2. 郑州大学生物工程系, 河南郑州 450001;
3. 河南省农业科学院, 河南省动物免疫学重点实验室, 河南郑州 450002;
4. 郑州大学生物工程系, 河南郑州 450001

收稿日期:2008-11-11 出版日期:2009-06-28
通讯作者: 王爱萍(1970 - ),女,青海西宁人,副教授,硕士生导师,主要从事分子免疫学和动物生物技术研究。
作者简介:游雷鸣(1981-), 男.河南新县人, 在读硕士, 主要从事分子细胞生物学研究.
基金资助:
"十一五"国家科技支撑计划(2006BAD06A04-6);河南省基础与前沿技术研究计划(082300433201)

Construction of Knockout Vector for sIgM λ Light Chain Gene from DT40 Cells

YoU Lei ming^1,2, LUo Jun¹, WANG Ai ping², ZHANG Gai ping¹, BU Dan², Guo Yan an², QI Yan hua²

1. Henan K ey Laboratory of Animal Immunology,Henan Academy of Agriculture Sciences, Zhengzhou 450002,China;
2. Department of Bioengineering,Zhengzhou University,Zhengzhou 450001,China

Received:2008-11-11 Published:2009-06-28

摘要/Abstract

摘要： 从鸡B淋巴DT40细胞系中克隆β-actin启动子,替换pCDNA3.1(+)载体中的SV40启动子,构建β-octin启动子驱动的Neomycin抗性基因表达框.将克隆的slgM λ轻链基因两侧各约2 kb的序列插入到抗性表达框的两侧作为同源臂.PCR、酶切以及测序结果表明成功构建了靶向slgM λ轻链基因的置换型打靶载体pCDNA-act-neo-HR.为建立slgM λ轻链基因敲除的DT40细胞模型,探究slgM λ轻链在IBDV感染DT40细胞过程中的作用奠定了基础.

关键词: slgM &lambda, 轻链, &beta, -actin启动子, 基因敲除, 同源重组

Abstract: β-actin promotor was cloned from chicken B lympha DT40 cells and used to replace the SV40 promotor of pCDNA3. 1( + )vector,so as to construct the Neomycin resistance express cassette driven byβ 2actin promotor. Then about 2 kb DNA sequenceson each side of the locusof sIgMλgene were inserted into the MCSof the constructed cassette,act2 ing as the homologous arm. PCR identification,restriction enzyme digestion and sequence analysis confirmed that the tar2 geting replacement vector pCDNA2act2neO₂HR for sIgMλgene was successfully constructed. This laid the foundation for establishing the model cell lack of sIgMλgene,and further investigating the roles of sIgMλlight chain in the infection of IBDV to DT40 cells.

Key words: sIgMλlight chain, &beta, 2actin promoter, Gene knockout, Homologous recombination

中图分类号:

Q782

游雷鸣, 罗俊, 王爱萍, 张改平, 卜丹, 郭亚男, 祈艳华. DT40细胞slgM λ轻链基因敲除载体的构建[J]. 华北农学报, 2009, 24(3): 1-6. doi: 10.7668/hbnxb.2009.03.001.

YoU Lei ming, LUo Jun, WANG Ai ping, ZHANG Gai ping, BU Dan, Guo Yan an, QI Yan hua. Construction of Knockout Vector for sIgM λ Light Chain Gene from DT40 Cells[J]. ACTA AGRICULTURAE BOREALI-SINICA, 2009, 24(3): 1-6. doi: 10.7668/hbnxb.2009.03.001.

http://www.hbnxb.net/CN/Y2009/V24/I3/1

参考文献

[1] Cosgrove A S.An apparently new disease of chicken-a-vian nephrosis[J].Avian Dis,1962,6:385-389.
[2] Hirai K,Calnek B W.In vitro replication of infectious bursal disease virus in established lymphoid cell lines and chicken B lymphocytes[J].Infect Immun,1979,25(3):964-970.
[3] Lin T W,Lo C W,Lai S Y,et al.Chicken heat shock protein 90 is a component of the putative cellular receptor complex of infectious bursal disease virus[J].J Virol,2007,81(16):8730-8741.
[4] Nieper H,Muller H.Susceptibillity of chicken lymphoid cells to infectious bursal disease virus does not correlate with the presence of specific binding sites[J].J Gen Virol,1996,77:1229-1237.
[5] Ogawa M,Yamaguchi T,Sefiyono A,et al.Some characteris-ties of a cenular receptor for virulent infectious bursal disease virus by using flow cytometry[J].Arch Virol,1998,143(12):2327-2341.
[6] Yamaguchi T,Iwata K,Kobayashi M,et al.Epitope mapping of capsid proteins VP₂ and VP₃ of IBDV[J].Archives of Vi-rology,1996,141:1493-1507.
[7] Bergelson J M,Cunningham J A,Droguett G,et al.Isolation of a common receptor for Coxsaekie B viruses and adenovirus-es 2 and 5[J].Science,1997,275(5304):1320-1323.
[8] Berger E A,Nurphy P M,Farber J M.Chemokine receptors as HIV-1 coreceptors:roles in viral entry,tropism,and disease[J].Annu Rev Immund,1999,7:657-700.
[9] Terasaki K,Hirayama H,Kasanga C J,et al.Chicken B lym-phoma DT40 cells as a useful tool for in vitro analysis of pathogeme infectious bursal disease virus[J].J Vet Med Sci,2008,70(4):407-410.
[10] Thomas K R,Capecehi M R.site-directed mutagenesis by gene targeting in mouse embryo-derived stem cells[J].Cell,1987,51(3):503-512.
[11] 李若楠,张彦.转基因动物技术及其应用[J].华北农学报,2007,22:181-184.
[12] 徐永华,常万存,丛笑情,等.动物细胞工程[M].第1版.北京:化学工业出版社,2003:96-97.
[13] 杨晓,黄培堂,黄翠芬,等.基因打靶技术[M].第1版.北京:科学出版社,2003:19-20.
[14] Thomas K R,Deng C,Capecchi M R.High-fidelity gene tar-geting in embryonic stem cells by using!sequence replace-ment vectors[J].Mol Cell Biol,1992,12(7):2919-2923.

[1]	靳芹, 张慧莉, 赵长乐, 曹小洁, 万银平, 王娜. upp基因在解淀粉芽孢杆菌C10遗传改造中的应用[J]. 华北农学报, 2021, 36(S1): 16-22.
[2]	荣恒, 张梦瑶, 贺建宁, 柳楠. *利用同源重组构建BMP6、BMPR1B真核表达载体及共转染成纤维细胞表达的研究*[J]. 华北农学报, 2020, 35(6): 195-201.
[3]	李晶, 张梦瑶, 刘开东, 柳楠, 贺建宁. *利用同源重组技术构建Hoxa5、BMP6真核表达载体及共转染成纤维细胞表达*[J]. 华北农学报, 2020, 35(4): 187-194.
[4]	刘瑞莉, 吴磊, 袁玮, 柏学进, 吕娟娟, 董雅娟. MYL3基因在肉牛肌肉生长过程中的功能研究[J]. 华北农学报, 2019, 34(2): 221-228.
[5]	滕域晰, 张洪艳, 席文迪, 梁世玉, 房玉林, 王华, 靳国杰. 基于底物压力法高效筛选葡萄霉菌病生防菌[J]. 华北农学报, 2018, 33(S1): 253-258.
[6]	张梦瑶, 杨峰, 刘开东, 刘积凤, 贺建宁, 柳楠. *利用同源重组技术构建DKK1、BMP4真核表达载体及共转染成纤维细胞表达的研究*[J]. 华北农学报, 2018, 33(5): 117-124.
[7]	张蕾, 代松宝, 张丽琳, 时培殿, 王家顺, 任婕, 黄金海. PCV2逃逸宿主天然免疫的分子机制研究[J]. 华北农学报, 2018, 33(2): 149-156.
[8]	王英泽, 王巧兰, 曹晴晴, 付育, 刘畅, 王晨晨, 杜朝. 简易型同源重组载体pAmpR-NeoR的构建和效果检测[J]. 华北农学报, 2017, 32(6): 25-30.
[9]	李婷, 练森, 李保华, 梁文星, 王彩霞. 苹果树腐烂病菌β-葡萄糖苷酶基因的克隆及表达分析[J]. 华北农学报, 2017, 32(6): 78-84.
[10]	吴华俊, 蔡紫玲, 罗淋淋, 林同. 松墨天牛肌球蛋白轻链2基因的鉴定及表达模式[J]. 华北农学报, 2015, 30(3): 25-30.
[11]	司贺龙, 佟亚萌, 郝志敏, 李志勇, 王楠, 董志平, 董金皋. 粟弯孢霉叶斑病菌G蛋白β亚基基因克隆及表达[J]. 华北农学报, 2014, 29(4): 7-12.
[12]	张晓菲, 张夏南, 王然, 张新富, 杨绍兰. 茌梨果实内切-β-1,4-葡聚糖酶基因的克隆及生物信息学分析[J]. 华北农学报, 2013, 28(3): 53-57.
[13]	夏淑春, 张茹琴, 王琰, 鲁闽, 鄢洪海. Curvularia lunata侵染不同抗性玉米品系的应答差异蛋白解析[J]. 华北农学报, 2013, 28(2): 42-45.
[14]	杨秋丽, 哈福, 李大林, 袁跃云, 袁峰, 霍金龙, 苗永旺. 牛科物种FSHβ基因外显子3编码区遗传多态性及其生物信息学分析[J]. 华北农学报, 2013, 28(2): 52-59.
[15]	陶志云, 单艳菊, 朱春红, 宋迟, 宋卫涛, 陈文峰, 李慧芳. 鸭胚胎骨骼肌TR-β mRNA发育性表达及与肌重相关性研究[J]. 华北农学报, 2012, 27(6): 15-19.

选择文件类型/文献管理软件名称

选择包含的内容

DT40细胞slgM λ轻链基因敲除载体的构建

Construction of Knockout Vector for sIgM λ Light Chain Gene from DT40 Cells

PDF

可视化

被引次数

摘要/Abstract

引用本文

使用本文

参考文献

相关文章 15

编辑推荐

Metrics

本文评价

模态框（Modal）标题

选择文件类型/文献管理软件名称

选择包含的内容

DT40细胞slgM λ轻链基因敲除载体的构建

Construction of Knockout Vector for sIgM λ Light Chain Gene from DT40 Cells

PDF

可视化

被引次数

摘要/Abstract

引用本文

使用本文

参考文献

相关文章 15

编辑推荐

Metrics

本文评价