一种大白菜新型甘蓝型油菜CMS快速鉴定方法及应用

doi:10.7668/hbnxb.20191301

华北农学报 ›› 2020, Vol. 35 ›› Issue (5): 26-31. doi: 10.7668/hbnxb.20191301

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一种大白菜新型甘蓝型油菜CMS快速鉴定方法及应用

刘晓东¹, 李海山², 孟川¹, 王玉海¹, 吴芳¹, 牟金贵¹, 马俊贤³, 王明秋¹

1. 河北省农林科学院经济作物研究所, 河北省蔬菜工程技术中心, 河北石家庄 050051;
2. 河北省农林科学院, 河北石家庄 050031;
3. 河北省市场监督管理局, 河北石家庄 050091

收稿日期:2020-05-20 出版日期:2020-10-28
通讯作者: 王明秋(1970-),男,河北宁晋人,研究员,主要从事大白菜遗传育种研究;马俊贤(1970-),男,河北盐山人,高级经济师,主要从事农业资源管理研究。
作者简介:刘晓东(1979-),男,河北晋州人,副研究员,硕士,主要从事大白菜遗传育种研究。
基金资助:
河北省农林科学院创新工程项目（2019-3-1-1）；河北省科学技术研究与发展计划（16226304D-1）；国家重点研发计划（2016YFD0101701）；国家大宗蔬菜产业技术体系项目（CARS-23-G-05）；河北省巨人计划—蔬菜创新团队建设（2019-2021）；河北省“三三三人才工程”项目（A202002020）

A Rapid Identification Method and Application of a New Brassica napus CMS in Chinese Cabbage

LIU Xiaodong¹, LI Haishan², MENG Chuan¹, WANG Yuhai¹, WU Fang¹, MU Jingui¹, MA Junxian³, WANG Mingqiu¹

1. Institute of Cash Crops of Hebei Academy of Agriculture and Forestry Sciences, Hebei Vegetable Engineering Technology Centre, Shijiazhuang 050051, China;
2. Hebei Academy of Agriculture and Forestry Sciences, Shijiazhuang 050031, China;
3. Hebei Administration for Market Regulation, Shijiazhuang 050091, China

Received:2020-05-20 Published:2020-10-28

摘要/Abstract

摘要： 针对目前甘蓝型油菜Pol CMS、新型萝卜胞质Ogu CMS、新型甘蓝型油菜CMS鉴定过程中，存在必须从orf138、orf222、orf224 3种引物中选用2对引物进行分子标记互相验证鉴定的缺点。以开发快速鉴别新型甘蓝型油菜CMS的分子标记为目的，选取含有Pol CMS的CMS-AQ29和含有新型甘蓝型油菜CMS的CMS后36高的2个材料基因组DNA为模板，通过引物orf222进行PCR扩增，经测序对比2种类型细胞质雄性不育系的核苷酸序列差异，确定主要差异区域为180~210 bp。通过orf222上游引物末端T/G碱基的错配，设计开发了快速鉴定新型甘蓝型油菜CMS的专用引物O-2，该引物可扩增出470 bp的核苷酸序列，而不含有新型甘蓝型油菜CMS的材料则不能扩增出核苷酸序列，具有能一次性快速鉴定出含有新型甘蓝型油菜CMS不育基因材料的特点。利用该引物对转育了新型甘蓝型油菜CMS的材料CMS-D571、CMS-D574及对应的保持系D571、D574分别进行了鉴定，证实雄性不育系CMS-D571、CMS-D574为转育了新型甘蓝型油菜CMS的雄性不育系，结果表明该方法稳定可靠。

关键词: 大白菜, 新型甘蓝型油菜CMS, 雄性不育系, 引物设计, 分子标记

Abstract: At present, in the identification process of Pol CMS, Ogu CMS and New Brassica napus CMS, two pairs of primers must be used for molecular marker screening from orf138, orf222 and orf224. In order to develop a new type of molecular markers for rapid identification of New Brassica napus CMS, PCR amplification was carried out by orf222 that based on genomic DNA of CMS-AQ29 and CMS Hou36gao which respectively contained Pol CMS and New Brassica napus CMS.The results showed that the main difference genomic DNA between the two varieties was from 180 to 210 bp. A special primer of New Brassica napus CMS was designed and developed by T/G base-based mismatch on the end of the orf222 upstream primer terminal. It was named O-2. It could identify male sterile lines with New Brassica napus CMS immediately, 470 bp nucleotide sequence could be amplified,but nucleotide sequence could't be amplified in other resources without New Brassica napus CMS. The defect was solved that identification of male sterility must be pairs of primer. This method was resulted that is stable and reliable, the CMS-D571 and CMS-D574 are successfully identified by using this method that including New Brassica napus CMS from D571, D574, CMS-D571 and CMS-D574.

Key words: Chinese cabbage, New Brassica napus, Male sterile lines, Primer design, Molecular marker

中图分类号:

S634.03

刘晓东, 李海山, 孟川, 王玉海, 吴芳, 牟金贵, 马俊贤, 王明秋. 一种大白菜新型甘蓝型油菜CMS快速鉴定方法及应用[J]. 华北农学报, 2020, 35(5): 26-31. doi: 10.7668/hbnxb.20191301.

LIU Xiaodong, LI Haishan, MENG Chuan, WANG Yuhai, WU Fang, MU Jingui, MA Junxian, WANG Mingqiu. A Rapid Identification Method and Application of a New Brassica napus CMS in Chinese Cabbage[J]. ACTA AGRICULTURAE BOREALI-SINICA, 2020, 35(5): 26-31. doi: 10.7668/hbnxb.20191301.

http://www.hbnxb.net/CN/Y2020/V35/I5/26

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