张德双, 张凤兰, 王永健, 余阳俊, 赵岫云, 徐家炳, 方智远
为了获得3种大白菜细胞质雄性不育系Ogu CMS, Pol CMS, CMS96和保持系间的多态性以及定位大白菜CMS96不育系所属的不育类型, 利用设计的atp6, orf222单一和混合引物PCR扩增3组11份同核异质大白菜细胞质雄性不育系和保持系mtDNA。结果表明, atp6引物在大白菜Ogu CMS不育系扩增的200 bp片段为其特异带; orf222引物仅在大白菜Pol CMS和CMS96不育系有扩增产物, 但二者有3点完全不同: 大白菜Pol CMS不育系扩增产物为675bp, CMS96不育系扩增产物为669 bp, 二者相差6个核苷酸, 后者定名为大白菜CMS96-orf222。大白菜CMS96-orf222与甘蓝型油菜Nap CMS的nad5c基因和Nap-orf222基因同源性均为99%, E值为0.0; 大白菜Pol CMS的675 bp序列具有ORF224开放阅读框, 没有保守结构域, 而大白菜CMS96的669 bp序列具有ORF222开放阅读框和保守结构域YMF19。另外, atp6和orf222混合引物多重PCR扩增产物存在明显多态性: 800 bp为大白菜保持系的差异带型; 2 300 bp和1 500 bp为大白菜Pol CMS不育系特异带型; 200 bp为大白菜Ogu CMS不育系特异带型; 690 bp为大白菜CMS96不育系特异带型。该方法仅用一次PCR反应快速地将3种大白菜细胞质雄性不育系和保持系一次性全部区分开, 为大白菜分子育种和常规育种更好地相结合提供了简单、快速、准确和重复性好的方法和手段。