农杆菌介导的<em>ACO</em>反义基因对铁皮石斛的遗传转化

doi:10.7668/hbnxb.2015.02.004

华北农学报 ›› 2015, Vol. 30 ›› Issue (2): 17-21. doi: 10.7668/hbnxb.2015.02.004

所属专题： 生物技术；

农杆菌介导的ACO反义基因对铁皮石斛的遗传转化

武荣花¹, 康莹莹¹, 王洁琼², 刘佳², 崔波^2,3, 蒋素华³, 张开明¹

1. 河南农业大学林学院, 河南郑州 450002;
2. 河南农业大学生命科学学院, 河南郑州 450002;
3. 郑州师范学院生物工程研究所, 河南郑州 450044

收稿日期:2015-02-26 出版日期:2015-04-28
通讯作者: 张开明(1978-),女,河南郑州人,副教授,博士,主要从事园林植物与观赏园艺研究。
作者简介:武荣花(1964-),女,河南叶县人,副教授,博士,主要从事花卉栽培生理研究。
基金资助:
国家自然科学基金项目(31101562);河南省高等学校重点科研项目(15A220006)

Genetic Transformation of ACO Antisense Gene into Dendrobium officinale Kimura et Migo. by Agrobacterium Mediation

WU Rong-hua¹, KANG Ying-ying¹, WANG Jie-qiong², LIU Jia², CUI Bo^2,3, JIANG Su-hua³, ZHANG Kai-ming¹

1. College of Forestry, Henan Agricultural University, Zhengzhou 450002, China;
2. College of Life Sciences, Henan Agricultural University, Zhengzhou 450002, China;
3. Institute of Biotechnology, Zhengzhou Normal University, Zhengzhou 450044, China

Received:2015-02-26 Published:2015-04-28

摘要/Abstract

摘要： 以铁皮石斛原球茎为受体,用农杆菌介导1-氨基环丙烷-1-羧酸氧化酶(ACO)的反义基因对铁皮石斛进行遗传转化,并对影响转化的几个因素进行优化,结果表明:经刀切法处理的原球茎,在AS浓度为100 μmol/L、农杆菌菌液OD₆₀₀值为0.8的条件下侵染30 min,共培养60 h,接种到含有30 mg/L Mer 和3.0 mg/L PPT的筛选培养基中,遗传转化效率最高。筛选获得的抗性植株经GUS组织化学染色和PCR鉴定,初步证明ACO反义基因已整合到铁皮石斛的基因组中。

关键词: 铁皮石斛, ACC氧化酶, 遗传转化, 根癌农杆菌

Abstract: The ACO antisense gene was transformed into the protocorms of Dendrobium officinale by Agrobacterium mediation.To optimize the transformation efficiency, several related factors were studied in this paper.The results showed that, after infected for 30 min at 100 μmol/L of AS, 0.8 of OD₆₀₀and 60 h of incubation in darkness, the cut protocorms gained the highest transformation rate in the medium of 30 mg/L Mer and 3.0 mg/L PPT.The selected plants were tested by PCR and GUS histochemical staining, indicating that the ACO antisense gene had been successfully integrated into D.officinale.

Key words: Dendrobium officinale, ACC oxidase, Genetic transformation, Agrobacterium tumefaciens

中图分类号:

武荣花, 康莹莹, 王洁琼, 刘佳, 崔波, 蒋素华, 张开明. 农杆菌介导的ACO反义基因对铁皮石斛的遗传转化[J]. 华北农学报, 2015, 30(2): 17-21. doi: 10.7668/hbnxb.2015.02.004.

WU Rong-hua, KANG Ying-ying, WANG Jie-qiong, LIU Jia, CUI Bo, JIANG Su-hua, ZHANG Kai-ming. Genetic Transformation of ACO Antisense Gene into Dendrobium officinale Kimura et Migo. by Agrobacterium Mediation[J]. ACTA AGRICULTURAE BOREALI-SINICA, 2015, 30(2): 17-21. doi: 10.7668/hbnxb.2015.02.004.

http://www.hbnxb.net/CN/Y2015/V30/I2/17

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