单核细胞增生李斯特菌sRNA伴侣分子<em>hfq</em>的基因克隆、表达及纯化

doi:10.7668/hbnxb.2014.05.014

华北农学报 ›› 2014, Vol. 29 ›› Issue (5): 80-87. doi: 10.7668/hbnxb.2014.05.014

所属专题： 生物技术；

单核细胞增生李斯特菌sRNA伴侣分子hfq的基因克隆、表达及纯化

彭叶龙¹, 乔军¹, 孟庆玲¹, 谢堃¹, 陈诚¹, 刘田莉¹, 马玉¹, 才学鹏², 陈创夫¹

1. 石河子大学动物科技学院, 动物疾病防控兵团重点实验室, 新疆石河子 832003;
2. 中国农业科学院兰州兽医研究所, 甘肃兰州 730046

收稿日期:2014-08-01 出版日期:2014-10-28
通讯作者: 乔军(1971-), 男, 陕西榆林人, 教授, 博士, 主要从事畜禽病原分子生物学研究。
作者简介:彭叶龙(1987-), 男, 河北石家庄人, 在读硕士, 主要从事病原分子生物学研究。
基金资助:
国家自然科学基金项目(31360596;30960274);国家国际科技合作专项(2014DFR31310)

Gene Cloning,Expression and Purification of sRNA Chaperone hfq of Listeria monocytogenes

PENG Ye-long¹, QIAO Jun¹, MENG Qing-ling¹, XIE Kun¹, CHEN Cheng¹, LIU Tian-li¹, MA Yu¹, CAI Xue-peng², CHEN Chuang-fu¹

1. Key Laboratory of Prevention and Control of Animal Disease, College of Animal Science and Technology, Shihezi University, Shihezi 832003, China;
2. Lanzhou Veterinary Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Lanzhou 730046, China

Received:2014-08-01 Published:2014-10-28

摘要/Abstract

摘要： 为克隆、表达单核细胞增生李斯特菌sRNA分子伴侣蛋白hfq基因,并纯化重组蛋白,通过PCR的方法从单核细胞增生李斯特菌基因组DNA中扩增出hfq基因,将扩增产物克隆于pMD18-T载体中,测序验证后,再将hfq基因亚克隆至表达载体pET-32a(+)中,成功构建pET-32a(+)-hfq原核表达载体。然后,转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,通过IPTG进行诱导表达,对表达蛋白进行可溶性分析,并采用Ni-NTA纯化目的蛋白。结果显示:克隆的hfq基因全长234 bp,编码77个氨基酸,通过SDS-PAGE可以检测到27 kDa的蛋白特异性条带;并从上清中纯化得到了Hfq融合蛋白。为进一步研究该蛋白的生物学功能奠定了基础。

关键词: 单核细胞增生李斯特菌, hfq 基因, sRNA伴侣分子, 克隆, 表达, 纯化

Abstract: In order to clone,express the Listeria monocytogenes sRNA chaprone hfq gene and purify the recombinant protein,the hfq gene was amplified by PCR from LM genome,the amplified products was cloned in pMD18-T vector,sequenced and subcloned in the expression vetor pET-32a(+).The recombinant pET-32a(+)-hfq expression vector was generated successfully and then was transformed into E.coli competent cells of BL21(DE3),induced by IPTG.The solubility of Hfq protein was analyzed and then the recombinant protein was purified by the Ni-NTA affinity chromatography.The result showed the hfq gene had a length of 234 bp,encoding 77 amino acids.The specific 27 kDa fusion protein was examined by SDS-PAGE.Finally,the fusion protein was obtained successfully from the supernatant.This study laid the foundation for further study the biological function of the Hfq protein.

Key words: Listeria monocytogenes, hfq gene, sRNA chaperone, Cloning, Expression, Purification

中图分类号:

S852
Q78

彭叶龙, 乔军, 孟庆玲, 谢堃, 陈诚, 刘田莉, 马玉, 才学鹏, 陈创夫. 单核细胞增生李斯特菌sRNA伴侣分子hfq的基因克隆、表达及纯化[J]. 华北农学报, 2014, 29(5): 80-87. doi: 10.7668/hbnxb.2014.05.014.

PENG Ye-long, QIAO Jun, MENG Qing-ling, XIE Kun, CHEN Cheng, LIU Tian-li, MA Yu, CAI Xue-peng, CHEN Chuang-fu. Gene Cloning,Expression and Purification of sRNA Chaperone hfq of Listeria monocytogenes[J]. ACTA AGRICULTURAE BOREALI-SINICA, 2014, 29(5): 80-87. doi: 10.7668/hbnxb.2014.05.014.

http://www.hbnxb.net/CN/Y2014/V29/I5/80

参考文献

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