马铃薯上PVY、PVS和PLRV的三重RT-PCR检测

doi:10.7668/hbnxb.2011.05.009

华北农学报 ›› 2011, Vol. 26 ›› Issue (5): 40-45. doi: 10.7668/hbnxb.2011.05.009

所属专题： 薯类作物；

马铃薯上PVY、PVS和PLRV的三重RT-PCR检测

张华鹏, 张剑峰, 刘俊莹, 王聪聪

青岛农业大学农学与植物保护学院植物病毒实验室, 山东青岛266109

收稿日期:2011-06-20 出版日期:2011-10-28
通讯作者: 张剑峰( 1964-) ，男，内蒙古呼和浩特人，教授，博士，主要从事分子植物病理学研究。
作者简介:张华鹏( 1983-) ，男，山东荣成人，在读硕士，主要从事分子植物病理学研究。
基金资助:
“十一五”国家科技支撑计划项目(2007BAD49B02-6)

Triplex-RT-PCR Detection of PVY,PVS and PLRV in Potato

ZHANG Hua-peng, ZHANG Jian-feng, LIU Jun-ying, WANG Cong-cong

College of Agricultural and Plant Protection, Qingdao Agricultural University, Plant Virus Laboratory, Qingdao 266109, China

Received:2011-06-20 Published:2011-10-28

摘要/Abstract

摘要： 根据PVY、PVS和PLRV外壳蛋白(Coat protein,CP)基因序列的保守区域设计各自的引物,利用三重RT-PCR技术实现了在同一反应体系中同时扩增出3种病毒产物。PVY、PVS和PLRV扩增产物测序长度均与目的片段的长度相符,分别为781,181,364 bp;各种病毒产物的测序结果同GeneBank中的序列比对后的同源性均高达95%以上。将3种病毒的RNA稀释后进行RT-PCR,PVY、PVS和PLRV的最低检测含量分别为4.5 pg/μL～4.5 fg/μL、3.7fg/μL和4.6 fg/μL。三重RT-PCR为检测单独或复合感染PVY、PVS和PLRV的马铃薯材料,提供了一种方便、高效的分子学方法。

关键词: 马铃薯, 病毒检测, 三重RT-PCR

Abstract: Three pairs of primers for PVY,PVS and PLRV,by comparing and finding out each conserved domain of CP sequence were designed,and then triplex-RT-PCR technology was used to amplify three product fragments of PVY,PVS and PLRV in one reaction simultaneously.The length of the PVY,PVS and PLRV are fit to the length of target DNA,781,181,364 bp respectively.The homology of the three viruses all reach up to 95% by comparing sequencing result with each published sequences in GeneBank respectively.After diluting the RNA samples,the minimum detection content for PVY,PVS and PLRV is 4.5 pg/μL-4.5 fg/μL,3.7 fg/μL and 4.6 fg/μL in RT-PCR respectively.Triplex-RT-PCR technology provides one convenient and high-efficiency molecular method to detect potato materials infected with one or more viruses among PVY,PVS and PLRV.

Key words: Potato, Virus detection, Triplex-RT-PCR

中图分类号:

S435.32

张华鹏, 张剑峰, 刘俊莹, 王聪聪. 马铃薯上PVY、PVS和PLRV的三重RT-PCR检测[J]. 华北农学报, 2011, 26(5): 40-45. doi: 10.7668/hbnxb.2011.05.009.

ZHANG Hua-peng, ZHANG Jian-feng, LIU Jun-ying, WANG Cong-cong. Triplex-RT-PCR Detection of PVY,PVS and PLRV in Potato[J]. ACTA AGRICULTURAE BOREALI-SINICA, 2011, 26(5): 40-45. doi: 10.7668/hbnxb.2011.05.009.

http://www.hbnxb.net/CN/Y2011/V26/I5/40

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