牡丹ACS基因片段的克隆及反义植物表达载体构建

doi:10.7668/hbnxb.2010.06.007

华北农学报 ›› 2010, Vol. 25 ›› Issue (6): 34-37. doi: 10.7668/hbnxb.2010.06.007

所属专题： 生物技术；

牡丹ACS基因片段的克隆及反义植物表达载体构建

范丙友², 高水平², 刘改秀³, 史国安¹, 李嘉珏¹, 孔祥生¹

1 河南科技大学林学院河南洛阳 471003;
2 中国洛阳国家牡丹基因库河南洛阳 471006;
3 河南科技大学农学院洛阳市牡丹生物学重点实验室河南洛阳 4710031

收稿日期:2010-10-10 出版日期:2010-12-28
通讯作者: 高水平(1976-)。女，河南洛阳人，讲师，硕士，主要从事园林植物与观赏园艺研究。
作者简介:范丙友(1974-)，男，河南伊川人，副教授，博士，主要从事分子生物学研究。
基金资助:
国家自然科学基金(30740013);教育部重点实验室开放基金(05-03);河南省教育厅自然基金(2008B210003);洛阳市重点实验室专项(0901063A);河南省重大科技攻关项目(0122012400)

Cloning of ACC Synthase Gene from Paeonia suffruticosa and Construction of Antisense Plant Expression Vector

FAN Bing-you², GAO Shui-ping², LIU Gai-xiu³, SHI Guo-an¹, LI Jia-jue¹, KONG Xiang-sheng¹

1 College of Agronomy,Luoyang Key Laboratory of Peony Biology,Henan University of Science and Technology,Luoyang 471003,China;
2 College of Forestry,Henan University of Science and Technology,Luoyang 471003,China;
3 Luoyang Notational Peony Genetic Storehouse,Luoyang 471006,China

Received:2010-10-10 Published:2010-12-28

摘要/Abstract

摘要： 根据GenBank登录的牡丹ACS基因DNA全长序列(FJ769773),设计一对特异性引物,在优化的PCR扩增体系的基础上,应用高保真DNA聚合酶KOD-Plus从洛阳红牡丹叶片总DNA中扩增出牡丹ACC合成酶基因片段PsACS-4。测序结果表明:克隆序列长970 bp,不包含牡丹ACS基因内含子序列,与目标序列同源性达100%;用SacI和SmaI对重组质粒和空载体pBI121双酶切、连接,将PsACS-4基因片段反身插入到植物表达载体pBI121的35S启动子下游,成功构建了牡丹ACS反义基因植物表达载体。

关键词: 牡丹, ACC合成酶, 反义植物表达载体

Abstract: According to the DNA full—length sequence of ACC synthase gene fragment of Paeonia suffruticosa (FJ769773)in GenBank database, a pair of specific primers, P1 and P2, were designed and synthesized.Based on the optimized PCR amplification system and high fidelity DNA polymerase KOD—Plus, ACS gene fragment P_sACS-4 was successfully amplified from the total DNA which was extracted from leaves of peony cuhivar Luo Yang Hong.Sequencing resuh indicated that the length of P_sACS-4 fragment was 970 bp, and the similarity of the sequence of P_sACS-4 and the target sequence was 100%.Two sequences alignment analysis revealed that sequence of P_sACS-4 didn 7t contain any intron sequence.The recombinant plasmid and the plant expression vector pBll21 were digested with the SacI and Sma I digest enzyme.After the fragment of ACC synthase gene and pBll21 were recovered and ligated, P_sACS一4 gene fragment was inserted into 35S promoter downstream of plant expression vector pBll21 reverse in orientation, and an antisense plant expression vector pBll21一anti-PsACS-4 was constructed successfully.

Key words: Paeonia suffruticosa, ACS, Antisense plant expression vector

中图分类号:

S685.11

范丙友, 高水平, 刘改秀, 史国安, 李嘉珏, 孔祥生. 牡丹ACS基因片段的克隆及反义植物表达载体构建[J]. 华北农学报, 2010, 25(6): 34-37. doi: 10.7668/hbnxb.2010.06.007.

FAN Bing-you, GAO Shui-ping, LIU Gai-xiu, SHI Guo-an, LI Jia-jue, KONG Xiang-sheng. Cloning of ACC Synthase Gene from Paeonia suffruticosa and Construction of Antisense Plant Expression Vector[J]. ACTA AGRICULTURAE BOREALI-SINICA, 2010, 25(6): 34-37. doi: 10.7668/hbnxb.2010.06.007.

http://www.hbnxb.net/CN/Y2010/V25/I6/34

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