拟南芥pre-miR399b植物表达载体的构建

doi:10.7668/hbnxb.2010.06.006

华北农学报 ›› 2010, Vol. 25 ›› Issue (6): 30-33. doi: 10.7668/hbnxb.2010.06.006

拟南芥pre-miR399b植物表达载体的构建

孙佃臣^1,2, 沙爱华¹, 单志慧¹, 陈李淼¹, 周新安¹

1 中国农业科学院油料作物研究所农业部油料作物生物学重点开放实验室湖北武汉 430062;
2 中国农业科学院研究生学院北京 100081

收稿日期:2010-10-07 出版日期:2010-12-28
通讯作者: 周新安(1963-)，男，湖北人，研究员，主要从事大豆遗传育种研究。
作者简介:孙佃臣(1986-)，男，山东邹城人，硕士，主要从事大豆转基因研究。
基金资助:
国家转基因重大专项重大课题(2009ZX08004-005)

Construction of A Plant Expression Vector Targeting the Arabidopsis thaliana pre-miR399b Gene

SUN Dian-chen^1,2, SHA Ai-hua¹, SHAN Zhi-hui¹, CHEN Li-miao¹, ZHOU Xin-an¹

1 Institute of Oil Crops Research,Chinese Academy of Agriculture Sciences,Wuhan 430062,China;
2 Graduate School of Chinese Academy of Agriculture Sciences,Beijing 100081,China

Received:2010-10-07 Published:2010-12-28

摘要/Abstract

摘要： 根据拟南芥miR399b茎环序列设计引物,PCR扩增克隆了拟南芥pre-miR399b(precursor miRNA)基因。采用LIC(Ligation-Independent cloning)法将pre-miR399b连接到双元植物表达载体pJG045上,构建成植物表达载体pS-DC2,并用冻融法将其导入根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)EHA105中。研究结果为将pre-miR399b基因转化大豆再生植株,鉴定miR399b基因在大豆磷吸收利用中的功能及培育磷高效大豆新品种奠定了基础。

关键词: 拟南芥, pre-miR399b, 载体构建

Abstract: miR399 could regulate Pi homeostasis, consists of six members(miR399a-f)in Arabidopsis thaliana.Here we cloned pre-miR399b fragment with primers designed according to the stem—loop sequence.The fragement was inserted into the multiple cloning sites of the binary vector pJG045 with Ligation-Independent cloning.The vector was transformed into the Agrobacterium tumefaciens strain EHAl05.It may provide an excellent foundation for functional verification of miR399b in soybean and cultivating high Pi·-efficiency soybean by delivering pre—miR399b gene into soybean.

Key words: Arabidopsis thaliana, pre—miR399b, Vector construction

中图分类号:

Q943.2

孙佃臣, 沙爱华, 单志慧, 陈李淼, 周新安. 拟南芥pre-miR399b植物表达载体的构建[J]. 华北农学报, 2010, 25(6): 30-33. doi: 10.7668/hbnxb.2010.06.006.

SUN Dian-chen, SHA Ai-hua, SHAN Zhi-hui, CHEN Li-miao, ZHOU Xin-an. Construction of A Plant Expression Vector Targeting the Arabidopsis thaliana pre-miR399b Gene[J]. ACTA AGRICULTURAE BOREALI-SINICA, 2010, 25(6): 30-33. doi: 10.7668/hbnxb.2010.06.006.

http://www.hbnxb.net/CN/Y2010/V25/I6/30

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