烟夜蛾幼虫中肠类钙粘蛋白基因cDNA片段的克隆与序列分析

doi:10.3321/j.issn:1000-7091.2007.01.036

华北农学报 ›› 2007, Vol. 22 ›› Issue (1): 152-155. doi: 10.3321/j.issn:1000-7091.2007.01.036

所属专题： 生物技术；

烟夜蛾幼虫中肠类钙粘蛋白基因cDNA片段的克隆与序列分析

李卫华¹, 苗雪霞², 黄勇平², 安世恒¹, 郭线茹¹

1. 河南农业大学植物保护学院, 河南郑州 450002;
2. 中国科学院上海生命科学院植物生理生态研究所, 上海 200032

收稿日期:2006-01-15 出版日期:2007-02-28
通讯作者: 郭线茹(1963-)，女，河南偃师人，教授，硕士生导师，博士，主要从事昆虫生态学的教学与科研工作。
作者简介:李卫华(1978-)，男，河南西华人，硕士研究生，主要从事昆虫分子生物学研究。
基金资助:
河南农业大学博士基金

cDNA Fragment Clone and Sequence Analysis of Cadherin-like Protein Gene in Tobacco Budworm (Helicoverpa assulta Guenée)

LI Wei-hua¹, MIAO Xue-xia², HUANG Yong-ping², AN Shi-heng¹, GUO Xian-ru¹

1. Plant Protection College of Henan Agricultural University, Zhengzhou 450002, China;
2. Shanghai Institute of Plant Physiology and Ecology, Shanghai Institutes for Biological Sciences, Chinese Academy of Sciences, Shanghai 200032, China

Received:2006-01-15 Published:2007-02-28

摘要/Abstract

摘要： 类钙粘蛋白位于昆虫中肠刷状缘膜囊泡上，该蛋白作为Bt毒素的受体可以与其结合导致昆虫死亡，因此，昆虫对Bt毒素的抗性与类钙粘蛋白有密切关系。本研究以烟夜蛾五龄幼虫中肠的总RNA为模板，根据已经克隆的其他昆虫的类钙粘蛋白基因序列设计引物，利用RT-PCR技术扩增出了烟夜蛾类钙粘蛋白基因的cDNA片段，将其连接到pMD18-T载体，转化大肠杆菌后筛选阳性克隆并进行序列测定，测序得到的1335 bp的片断编码444个氨基酸残基。序列分析表明，该氨基酸序列与棉铃虫和烟芽夜蛾类钙粘蛋白的一致性分别为95%和86%。研究结果对进一步研究昆虫对Bt毒素产生抗性的机制以及发展分子技术快速检测并监测田间昆虫抗性基因的产生奠定了基础。

关键词: 烟夜蛾, 类钙粘蛋白, 基因克隆, 序列分析

Abstract: Cadherin-like protein acts as a receptor of Bt toxin by binding with toxin in brush border membrane of insect. Insect resistance to Bt toxin is related with the variation of cadherin-like protein gene. cDNA fragment of cadherin-like protein gene in the fifth instar larva of oriental tobacco budworm was amplified using degeneracy primers and RT-PCR technique, and the target fragment was further sequenced after being cloned into pMD18-T vector plasmid. The sequence analysis showed that 1335 bp nucleotide fragment that encodes 444 amino acid residues was located in the encoding frame. Compared with cadherin-like protein of Helicoverpa armigera and Heliothis virescens, the identity of amino acid sequence were 95% and 86%, respectively.

Key words: Helicoverpa assulta Guené, e, Cadherin-like protein, Gene cloning, Sequence analysis

中图分类号:

S433.4

李卫华, 苗雪霞, 黄勇平, 安世恒, 郭线茹. 烟夜蛾幼虫中肠类钙粘蛋白基因cDNA片段的克隆与序列分析[J]. 华北农学报, 2007, 22(1): 152-155. doi: 10.3321/j.issn:1000-7091.2007.01.036.

LI Wei-hua, MIAO Xue-xia, HUANG Yong-ping, AN Shi-heng, GUO Xian-ru. cDNA Fragment Clone and Sequence Analysis of Cadherin-like Protein Gene in Tobacco Budworm (Helicoverpa assulta Guenée)[J]. ACTA AGRICULTURAE BOREALI-SINICA, 2007, 22(1): 152-155. doi: 10.3321/j.issn:1000-7091.2007.01.036.

http://www.hbnxb.net/CN/Y2007/V22/I1/152

参考文献

[1] McGaughey W H. Insect resistance to the biological insecticide Bacillus thuringiensis[J]. Science, 1985, 229 (4709): 193-195.
[2] Gunning R V, Dang H T, Kemp F C, et al. New resistance mechanism in Helicoverpa armigera threatens transgenic crops expressing Bacillus thuringiensis CrylAc toxin[J]. Appl Environ Microbiol, 2005, 71(5): 2558-2563.
[3] Francis B R, Bulla L A Jr. Further characterization of BTR1, the cadherin-like receptor for Cry1Ab toxin in tobacco hornworm (Manduca sexta) midguts[J]. Insect Biochem Mol Biol, 1997, 27(6): 541-550.
[4] Gahan L J, Gould F, Heckel D G. Identification of a gene associated with Bt resistance Heliothis virescenss[J]. Science, 2001, 293(5531): 857-860.
[5] Xu X, Yu L, Wu Y. Disruption of a cadherin gene associated with resistance to Cry1Ac delta-endotoxin of Bacillus thuringiensis in Helicoverpa armigera[J]. Appl Environ Microbiol, 2005, 71 (2): 948-954.
[6] Hua G, Jurat-Fuentes J L, Adang M J. Bt-R1a extracellular cadherin repeat 12 mediates Bacillus thuringiensis Cry1Ab binding and cytotoxicity[J]. J Biol Chem, 2004, 279 (27): 28051-28056.
[7] Dorsch J A, Candas M, Griko N B, et al. Cry1A toxins of Bacillus thuringiensis bind specifically to a region adjacent to the membrane-proximal extracellular domain of BT-R (1) in Mandluca sexta: involvement of a cadherin in the entomopathogenicity of Bacillus thuringiensis[J]. Insect Biochem Mol Biol, 2002, 32 (9): 1025-1036.
[8] Nagamatsu Y, Toda S, Koike T, et al. Cloning, sequencing and expression of the Bombyx mori receptor for Bacillus thuringiensis insecticidal CryIA (a) toxin[J]. Biosci Biotechnol Biochem, 1998, 62 (4): 727-734.
[9] Vadlamudi R K, Weber E, Ji I, et al. Cloning and expression of a receptor for an insecticidal toxin of Bacillus thuringiensis[J]. J Biol Chem, 1995, 270 (10): 5490-5494.
[10] 王桂荣, 吴孔明, 梁革梅, 等. 棉铃虫中肠钙粘蛋白基因的克隆、表达及Cry1A结合区定位[J]. 中国科学C辑, 2004, 34(6): 537-546.
[11] Morin S, Biggs R W, Sisterson M S, et al. Three cadherin alleles associated with resistance to Bacillus thuringiensis in pink bollworm[J]. PNAS, 2003, 100(9): 5004-5009.
[12] Xie R, Zhuang M, Ross L S, et al. Single amino acid mutations in the cadherin receptor from Heliothis virescenss affeet its toxin binding ability to Cry1 A toxins[J]. J Biol Chem, 2005, 280(9): 8416-8425.
[13] 安世恒, 郭线茹, 罗梅浩, 等. 烟夜蛾幼虫中肠CrylAc毒索受体蛋白cDNA片断的克隆和序列测定[J]. 华北农学报, 2005, 20(2): 84-88.
[14] Coates B S, Sumerford D V, Hellmich R L, et al. Sequence variation in the cadherin gene of Ostrinia nubilalis: a tool for field monitoring[J]. Insect Biochem Mol Biol, 2005, 35 (2): 129-139.

[1]	肖士奎, 李芳, 张文婷, 吕淑芳, 史国安, 吴疆, 范丙友. *芍药ACS基因的克隆及其蛋白质原核表达*[J]. 华北农学报, 2022, 37(5): 36-44.
[2]	侯瑞泽, 侯玉翔, 许小勇, 李璿, 李梅兰. 普通白菜CYP同源基因克隆与表达分析[J]. 华北农学报, 2022, 37(5): 45-51.
[3]	金一锋, 高岩松, 王琦, 王萌萌, 赵迪, 熊毅, 陈阳. *草地早熟禾蛋白激酶SnRK2.4* 基因克隆及非生物胁迫响应分析**[J]. 华北农学报, 2022, 37(5): 9-15.
[4]	张冬梅, 冯亚艳, 修志君, 杨春芳, 杜美娥, 李得宙, 张笑宇. *硅酸钠诱导的马铃薯抗黑痣病StWRKY11基因克隆及生物信息学分析*[J]. 华北农学报, 2022, 37(5): 194-203.
[5]	郑玉斯, 王培, 郭颖, 白丽蓉, 喻达辉, 赵森. *合浦珠母贝PfCLEC17A* 基因的克隆及表达分析**[J]. 华北农学报, 2022, 37(5): 230-238.
[6]	王亚男, 梁岩岩, 严文培, 张银萍, 李强, 吴秀菊. *北细辛AhOMT1基因的克隆及原核表达分析*[J]. 华北农学报, 2022, 37(4): 62-70.
[7]	贾志强, 许云玉, 高雪, 陶宏征, 陈增敏, 刘雅婷, 李永忠. *辣椒CaWRKY30转录因子的克隆、亚细胞定位及番茄斑萎病毒侵染下的表达分析*[J]. 华北农学报, 2022, 37(3): 186-192.
[8]	程春红, 游经番, 蔡兆明, 叶春宏, 陈丽. *茎瘤芥BjuEAR1-1的克隆与表达分析*[J]. 华北农学报, 2022, 37(3): 37-43.
[9]	唐忠丽, 逯晓楠, 赵蕊, 刘庆华, 李梅兰, 雷逢进, 许小勇. *黄皮西葫芦类胡萝卜素合成酶基因的鉴定及PSY1和LCYE2克隆分析*[J]. 华北农学报, 2022, 37(3): 60-67.
[10]	赵惠英, 杨光凯, 高燕, 张小军, 郝燕燕. *苹果MdSGR2基因克隆及植物超表达载体构建*[J]. 华北农学报, 2022, 37(2): 42-48.
[11]	陈龙正, 刘静, 刘之洋, 夏彭飞, 袁希汉, 宁宇. *苦瓜白粉病响应基因McMLO1的克隆及表达分析*[J]. 华北农学报, 2022, 37(1): 165-171.
[12]	连凯琪, 纪爽, 周玲玲, 时志琪, 王飞, 张元臣. 黏虫clip型丝氨酸蛋白酶基因的克隆及原核表达[J]. 华北农学报, 2022, 37(1): 195-201.
[13]	李琪, 杨昌恒, 王永, 林亚秋, 向华, 朱江江. 山羊CIDE家族基因克隆分析及互作蛋白预测鉴定[J]. 华北农学报, 2022, 37(1): 211-221.
[14]	贾伟哲, 焦博, 王娇, 陈文烨, 杨帆, 刘永伟, 董福双, 赵立群, 周硕. *小麦类钙调素TaCML8-A基因的克隆和表达分析*[J]. 华北农学报, 2022, 37(1): 1-8.
[15]	唐文芳, 徐升胜, 段延碧, 龙雯虹, 杨荣萍, 张雪梅, 孟金贵. 山药DoIPTs基因克隆及珠芽发芽期表达分析[J]. 华北农学报, 2022, 37(1): 27-34.

选择文件类型/文献管理软件名称

选择包含的内容

烟夜蛾幼虫中肠类钙粘蛋白基因cDNA片段的克隆与序列分析

cDNA Fragment Clone and Sequence Analysis of Cadherin-like Protein Gene in Tobacco Budworm (Helicoverpa assulta Guenée)

PDF

可视化

被引次数

摘要/Abstract

引用本文

使用本文

参考文献

相关文章 15

编辑推荐

Metrics

本文评价

模态框（Modal）标题

选择文件类型/文献管理软件名称

选择包含的内容

烟夜蛾幼虫中肠类钙粘蛋白基因cDNA片段的克隆与序列分析

cDNA Fragment Clone and Sequence Analysis of Cadherin-like Protein Gene in Tobacco Budworm (Helicoverpa assulta Guenée)

PDF

可视化

被引次数

摘要/Abstract

引用本文

使用本文

参考文献

相关文章 15

编辑推荐

Metrics

本文评价