猪2型圆环病毒SYBR Green荧光定量PCR检测方法的建立

doi:10.7668/hbnxb.2014.03.014

华北农学报 ›› 2014, Vol. 29 ›› Issue (3): 68-73. doi: 10.7668/hbnxb.2014.03.014

所属专题： 畜牧；

猪2型圆环病毒SYBR Green荧光定量PCR检测方法的建立

郭慧娟^1,2, 李秀丽², 张国伟², 鄢明华², 王利丽², 张莉², 孙英峰²

1. 天津农学院, 天津 300384;
2. 天津市畜牧兽医研究所, 天津 300381

收稿日期:2014-03-15 出版日期:2014-06-28
通讯作者: 李秀丽（1975-），女，天津宝坻人，副研究员，主要从事畜禽传染病诊断与防治技术研究。
作者简介:郭慧娟（1987-），女，山西太原人，硕士，主要从事动物疾病诊断与控制的研究。
基金资助:
天津市应用基础与前沿研究计划重点项目（11JCZDJC17700）

Establishment and Application of SYBR Green Fluorescence Quantitative PCR for Detection of Porcine Circovirus Type 2

GUO Hui-juan^1,2, LI Xiu-li², ZHANG Guo-wei², YAN Ming-hua², WANG Li-li², ZHANG Li², SUN Ying-feng²

1. Tianjin Agricultural University, Tianjin 300384, China;
2. Animal Husbandry and Veterinary Research Institute of Tianjin, Tianjin 300381, China

Received:2014-03-15 Published:2014-06-28

摘要/Abstract

摘要： 通过对荧光定量PCR反应条件的优化，建立了一种检测PCV2的SYBR Green荧光定量PCR方法。试验结果表明，该方法特异性强，与猪1型圆环病毒、猪流感病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病毒等均无交叉反应。该方法最低可检测到10拷贝/μL的DNA，比PCR检测方法敏感性高1 000倍；其标准曲线线性范围是6.84×10²～6.84×10⁷ 拷贝，且具有良好的重复性。

关键词: 猪2型圆环病毒, SYBR Green, 荧光定量PCR, 标准曲线

Abstract: By quantitative PCR optimization of reaction conditions, a real-time detection of PCV2 SYBR Green quantitative PCR method was established.The results indicated that the method was specificity, the porcine circovirus type 1(PCV1), swine influenza virus(SIV), porcine reproductive and respiratory syndrome virus(PRRSV), pig pseudorabies virus(PRV) and other common diseases of the original pig detection results were negative.The detection limit of the assay was 10 copies/μL of plasmid DNA, 1 000 times higher than that of the routine PCR.The standard curve displayed a linear range from 6.84×10² to 6.84×10⁷ copies and a good reproducibility.

Key words: Porcine circovirus type 2, SYBR Green, Fluorescent quantitative PCR, Standard curve

中图分类号:

S858.28

郭慧娟, 李秀丽, 张国伟, 鄢明华, 王利丽, 张莉, 孙英峰. 猪2型圆环病毒SYBR Green荧光定量PCR检测方法的建立[J]. 华北农学报, 2014, 29(3): 68-73. doi: 10.7668/hbnxb.2014.03.014.

GUO Hui-juan, LI Xiu-li, ZHANG Guo-wei, YAN Ming-hua, WANG Li-li, ZHANG Li, SUN Ying-feng. Establishment and Application of SYBR Green Fluorescence Quantitative PCR for Detection of Porcine Circovirus Type 2[J]. journal1, 2014, 29(3): 68-73. doi: 10.7668/hbnxb.2014.03.014.

http://www.hbnxb.net/CN/Y2014/V29/I3/68

参考文献

[1] Guo L J,Lu Y H,Wei Y W,et al.Porcine circovirus type 2(PCV2):Genetic variation and newly emerging genotypes in China [J].Virol J,2010,7:273.
[2] Baylis S A,Finsterbusch T,Bannert N, et a1.Analysis of porcine circovirus type 1 detected in Rotarix vaccine[J].Vaccine,2011,29(4):690-697.
[3] 韩庆功,崔艳红,张智勇.我国猪圆环病毒2型感染的危害[J].黑龙江畜牧兽医,2010(22):84-85.
[4] 田家伟,吴霞,张亮,等.重庆地区某规模化猪场猪圆环病毒2型的PCR检测[J].黑龙江畜牧兽医,2013,3(5):89-90.
[5] 崔尚金,全滟平,李曦,等.猪圆环病毒间接免疫荧光方法的建立[J].中国预防兽医学报,2007,29(1):63-66.
[6] 刘英玉,刘晓丽,廖荣斌,等.利用单抗免疫组化技术检测PCV-2 WH株在人工感染猪组织中的分布[J].中国兽医学报,2010,30(12):1576-1579.
[7] 董志强,张志,李晓成,等.猪圆环病毒PCR 检测方法的优化[J].中国病毒学,2006,21(4):405-407.
[8] 陈小金,陈建飞,时洪艳,等.猪轮状病毒SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法的建立[J].中国兽医科学,2010,40(02):174-179.
[9] 余莹,朱彩霞,杨志彪,等.人双埃克病毒SYBR Green I荧光定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用[J].上海交通大学学报:农业科学版,2012,30(1):1-7.
[10] 顾帅,陈陆,常洪涛,等.SYBR Green Ⅰ实时PCR对猪细小病毒体外复制动态分析[J].中国兽医学报,2012,32(3):350-354.
[11] 阳成波,印遇龙,黄瑞林,等.实时定量RT-PCR的原理及方法[J].免疫学杂志,2003,19(S1):145-150.
[12] 来景辉,张堂田,范红结.猪圆环病毒分子生物学研究进展[J].黑龙江畜牧兽医,2013,13(13):24-27.
[13] 张福良,宋长绪,朱道中,等.基于TaqMan探针的猪圆环病毒1型实时荧光定量PCR检测方法的建立[J].中国兽医科学,2007,37(6):477-481.
[14] Turner M J,Medley G F,Woodbine K A,et al.The relationship between porcine circovirus 2 antigen score and antibody titre and histology of lymph nodes in 375 euthanased sick and healthy pigs from 113 British pig farms with and without postweaning multisystemic wasting syndrome[J].Preventive Veterinary Medicine,2009,88(3):213-219.
[15] Brunborg I M,Fossum C,Lium B,et al.Dynamics of serum antibodies to and load of porcine circovirus type 2(PCV2) in pigs in three finishing herds,affected or not by postweaning multisystemic wasting syndrome[J].Acta Veterinaria Scandinavica,2010,52:22.

选择文件类型/文献管理软件名称

选择包含的内容

猪2型圆环病毒SYBR Green荧光定量PCR检测方法的建立

Establishment and Application of SYBR Green Fluorescence Quantitative PCR for Detection of Porcine Circovirus Type 2

PDF

可视化

被引次数

摘要/Abstract

引用本文

使用本文

参考文献

相关文章 15

编辑推荐

Metrics

本文评价

[1]	魏亚蕊, 赵曙良, 成晓华, 闫琦, 刘娜, 张玉星. 水杨酸诱导鸭梨抗黑斑病效果及机理的探讨[J]. 华北农学报, 2022, 37(2): 183-191.
[2]	付程程, 黄淮安, 周梦蝶, 钟天秀, 张向前, 陈曙, 解新明. 象草叶片和茎秆木质素合成相关基因的表达模式分析[J]. 华北农学报, 2020, 35(4): 87-95.
[3]	陈利达, 袁军海, 李磊, 石延霞, 柴阿丽, 谢学文, 李宝聚. 镰孢菌属实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用[J]. 华北农学报, 2019, 34(S1): 296-301.
[4]	李欣, 崔秀明, 刘迪秋, 孙恬, 郭爱玲, 陈军. 三七根腐病菌尖孢镰刀菌的Real-time PCR检测方法[J]. 华北农学报, 2019, 34(S1): 324-330.
[5]	宋建, 薛俊, 金凤媚, 孙海波, 张越, 王姝, 范寰, 周祥明, 陈锐. ToCV和TYLCV复合侵染番茄后部分病毒基因序列分析及实时荧光定量PCR分析[J]. 华北农学报, 2019, 34(2): 95-102.
[6]	却志群, 於紫蕾, 沈春修. *水稻膜联蛋白基因OsAnn8干旱和低温条件下表达模式以及CRISPR/Cas9定点编辑*[J]. 华北农学报, 2019, 34(1): 54-60.
[7]	郭静文, 史晓蕾, 刘茜, 赵青松, 邸锐, 刘兵强, 闫龙, 王凤敏, 张孟臣, 赵宝华, 杨春燕. 基于转录组测序技术挖掘大豆蛋白质合成相关基因[J]. 华北农学报, 2019, 34(1): 61-73.
[8]	李林杰, 刘萍, 马鹏, 王悦萦, 郭富城, 马晓霞, 周建华, 柏家林. 小反刍兽疫病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立[J]. 华北农学报, 2018, 33(S1): 84-88.
[9]	崔菲菲, 孟川, 王彦华, 赵建军, 陈雪平, 申书兴, 顾爱侠. 大白菜-结球甘蓝易位系实时荧光定量PCR内参基因的筛选[J]. 华北农学报, 2018, 33(5): 60-67.
[10]	贺慧, 虢慧, 官春云. *甘蓝型油菜BnACP5基因克隆及表达分析*[J]. 华北农学报, 2018, 33(1): 96-101.
[11]	马鹏, 李林杰, 常秋燕, 王悦萦, 郭富城, 刘萍, 马晓霞, 马忠仁. BVDV SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法与RT-PCR方法的建立与应用[J]. 华北农学报, 2017, 32(S1): 49-53.
[12]	杜方, 王婷, 樊俊苗, 张浩宇. 新铁炮百合朱丽叶器官差异基因表达分析[J]. 华北农学报, 2017, 32(5): 25-30.
[13]	丁红, 戴良香, 秦斐斐, 慈敦伟, 宋文武, 张智猛. *花生膜联蛋白基因AhAnn1的克隆与表达分析*[J]. 华北农学报, 2017, 32(3): 21-26.
[14]	苏丽艳, 田爱梅, 陶贵荣, 李蒙. *苹果MdCaM的克隆及其对果实釆后非生物胁迫的响应*[J]. 华北农学报, 2017, 32(1): 47-52.
[15]	毛玉梅, 李琴, 付鸣佳, 金华燕, 沈俊良, 钟雪晴. *蛹虫草CmKexin基因克隆和菌丝体中表达检测*[J]. 华北农学报, 2016, 31(4): 112-118.

模态框（Modal）标题

选择文件类型/文献管理软件名称

选择包含的内容

猪2型圆环病毒SYBR Green荧光定量PCR检测方法的建立

Establishment and Application of SYBR Green Fluorescence Quantitative PCR for Detection of Porcine Circovirus Type 2

PDF

可视化

被引次数

摘要/Abstract

引用本文

使用本文

参考文献

相关文章 15

编辑推荐

Metrics

本文评价