表达鸡白细胞介素18重组禽痘病毒的构建及其表达产物生物学活性的检测

doi:10.7668/hbnxb.2008.06.002

华北农学报 ›› 2008, Vol. 23 ›› Issue (6): 6-10. doi: 10.7668/hbnxb.2008.06.002

所属专题： 畜牧；

表达鸡白细胞介素18重组禽痘病毒的构建及其表达产物生物学活性的检测

陈红英¹, 黄青云², 崔保安¹, 李新生¹, 管倩¹, 刘金朋¹

1. 河南农业大学, 牧医工程学院, 河南, 郑州, 450002;
2. 华南农业大学, 兽医学院, 广东, 广州, 510642

收稿日期:2008-10-04 出版日期:2008-12-28
通讯作者: 崔保安(1948－)，男，河南荥阳人，教授，博士生导师，主要从事分子病原学及分子免疫学研究。
作者简介:陈红英(1965－)，女，四川仁寿人，副研究员，博士，主要从事分子免疫学和分子病毒学研究。
基金资助:
国家“十一五”科技支撑计划专项(2006BAD06A08)

Construction of Recombinant Fowlpox Virus Expressing Chicken Interleukin-18 and Its Biologic Activity Detection

CHEN Hong-ying¹, HUANG Qing-yun², CUI Bao-an¹, LI Xin-sheng¹, GUAN Qian¹, LIU Jin-peng¹

1. College of Animal Husbandry and Veterinary, Henan Agricultural University, Zhengzhou 450002, China;
2. College of Veterinary Medicine, South China Agricultural University, Guangzhou 510642, China

Received:2008-10-04 Published:2008-12-28

摘要/Abstract

摘要： 为构建表达鸡IL－18的重组禽痘病毒，将含痘病毒启动子LP2EP2驱动的鸡IL－18基因插入到禽痘病毒转移载体pSY681中，获得重组转移载体pSY681/ChIL－18。将pSY681/ChIL－18转染已感染亲本禽痘病毒S－FPV－017株的鸡胚成纤维细胞，使其在鸡胚成纤维细胞内与禽痘病毒基因组发生同源重组，产生表达鸡IL－18的重组禽痘病毒rFPV－ChIL－18。在含有X－gal的营养琼脂培养基上进行蓝斑筛选后，对重组病毒rFPV－ChIL－18又进行了多次蚀斑克隆。以重组禽痘病毒DNA为模板，利用鸡IL－18基因特异引物进行PCR，扩增出1条约0.6 kb的带。收集含鸡IL－18蛋白的细胞上清液进行MTT试验，表达的产物能明显提高鸡淋巴细胞的转化率。

关键词: 鸡IL－18基因, 重组禽痘病毒, 构建, 生物学活性

Abstract: In order to construct the recombinant fowlpox viruses(rFPV)expressing chicken IL-18, the chicken IL-18 cDNA was cloned into EcoR Ⅰ site of pSY538 plasmid and then subcloned into Sfi Ⅰ site of pSY681 plasmid containing LacZ gene to generate the recombinant plasmid pSY681/ChIL-18.The recombinant plasmid was transfected on the chick- en embryo fibroblasts cell(CEF)that was pre-infected with S-FPV-017.By screening of blue plaques on the CEF overlaid with agar containing X-gal, the rFPV ChIL-18 recombinants were obtained and identified by PCR.Recombinant chicken IL-18 induced in vitro the proliferation of ConA-stimulated chicken splenocytes in MTT assay.

Key words: Chicken interleukin-18 gene, Recombinant fowlpox virus, Construction, Biologic activity

中图分类号:

S82.4
Q786

陈红英, 黄青云, 崔保安, 李新生, 管倩, 刘金朋. 表达鸡白细胞介素18重组禽痘病毒的构建及其表达产物生物学活性的检测[J]. 华北农学报, 2008, 23(6): 6-10. doi: 10.7668/hbnxb.2008.06.002.

CHEN Hong-ying, HUANG Qing-yun, CUI Bao-an, LI Xin-sheng, GUAN Qian, LIU Jin-peng. Construction of Recombinant Fowlpox Virus Expressing Chicken Interleukin-18 and Its Biologic Activity Detection[J]. ACTA AGRICULTURAE BOREALI-SINICA, 2008, 23(6): 6-10. doi: 10.7668/hbnxb.2008.06.002.

http://www.hbnxb.net/CN/Y2008/V23/I6/6

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