基于PCR方法对载体pBluescriptⅡSK(+)及pCAMBⅠA1300的定点突变

doi:10.7668/hbnxb.2016.06.013

华北农学报 ›› 2016, Vol. 31 ›› Issue (6): 83-87. doi: 10.7668/hbnxb.2016.06.013

基于PCR方法对载体pBluescriptⅡSK(+)及pCAMBⅠA1300的定点突变

蒲艳, 刘超, 林琪, 李继洋, 刘晓东

新疆农业大学农学院, 农业生物技术重点实验室, 新疆乌鲁木齐 830052

收稿日期:2016-06-04 出版日期:2016-12-28
通讯作者: 刘晓东(1975-),男,新疆乌鲁木齐人,副教授,博士,主要从事作物分子设计育种研究。
作者简介:蒲艳(1992-),女,新疆乌鲁木齐人,在读硕士,主要从事植物分子生物学研究。
基金资助:
国家自然科学基金项目（31560534）

Site-directed Mutagenesis of pBluescript Ⅱ SK(+) and pCAMBⅠA1300 Vectors Based on PCR Method

PU Yan, LIU Chao, LIN Qi, LI Jiyang, LIU Xiaodong

College of Agronomy, Xinjiang Agricultural University, Key Laboratory of Agricultural Biological Technology, Urumqi 830052, China

Received:2016-06-04 Published:2016-12-28

摘要/Abstract

摘要： 运用PCR定点突变技术对载体pBluescript Ⅱ SK（+）以及植物表达载体pCAMBⅠA1300多克隆位点内相关的酶切位点进行改造，为运用CRISPR/Cas9基因编辑载体在构建敲除体系时提供更多便捷可用的酶切位点。通过酶切鉴定以及测序表明，成功将pBluescript Ⅱ SK（+）载体多克隆位点内Xho Ⅰ、Eco R Ⅴ、Sma Ⅰ、Sac Ⅱ 4个酶切位点，分别改造为Nhe Ⅰ、Mfe Ⅰ、Nsi Ⅰ、Pac Ⅰ；将pCAMBⅠA1300植物表达载体多克隆位点内的Sac Ⅰ、Sal Ⅰ以2个酶切位点分别改造为Nsi Ⅰ、Pac Ⅰ，为今后构建CRISPR/Cas9基因组编辑载体及对植物功能基因进行精准定位研究奠定一定的理论基础。

关键词: pBluescript Ⅱ SK(+), pCAMBⅠA1300, 定点突变, PCR

Abstract: In order to provide more convenient and efficient restriction enzyme site for the construction of CRISPR/Cas9 gene editing system in the future,the multiple clone site of pBluescript Ⅱ SK(+) and pCAMBⅠA1300 vectors were modified.DNA sequences showed that site-directed mutagenesis were successfully implemented in both pBluescript Ⅱ SK(+) and pCAMBⅠA1300 vectors.The four clone sites of pBluescript Ⅱ SK(+) about Xho Ⅰ, Eco R Ⅴ, Sma Ⅰ, Sac Ⅱ were transformed to Nhe Ⅰ, Mfe Ⅰ, Nsi Ⅰ, Pac Ⅰ respectely;Two clone sites of pCAMBⅠA1300, Sac Ⅰ and Sal Ⅰ were changed to Nsi Ⅰ, Pac Ⅰ.Thus,lay solid foundation for further use on CRISPR/Cas9 genome editing vector.

Key words: pBluescript Ⅱ SK(+), pCAMBⅠA1300, Site-directed mutagenesis, PCR

中图分类号:

蒲艳, 刘超, 林琪, 李继洋, 刘晓东. 基于PCR方法对载体pBluescriptⅡSK(+)及pCAMBⅠA1300的定点突变[J]. 华北农学报, 2016, 31(6): 83-87. doi: 10.7668/hbnxb.2016.06.013.

PU Yan, LIU Chao, LIN Qi, LI Jiyang, LIU Xiaodong. Site-directed Mutagenesis of pBluescript Ⅱ SK(+) and pCAMBⅠA1300 Vectors Based on PCR Method[J]. ACTA AGRICULTURAE BOREALI-SINICA, 2016, 31(6): 83-87. doi: 10.7668/hbnxb.2016.06.013.

http://www.hbnxb.net/CN/Y2016/V31/I6/83

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