葡萄逆境胁迫诱导启动子的克隆及表达分析

doi:10.7668/hbnxb.2016.01.013

华北农学报 ›› 2016, Vol. 31 ›› Issue (1): 77-82. doi: 10.7668/hbnxb.2016.01.013

所属专题： 葡萄；抗旱节水；

葡萄逆境胁迫诱导启动子的克隆及表达分析

吕兆勇¹, 赵春梅², 薛仁镐²

1. 聊城市人民医院, 山东聊城 252000;
2. 青岛农业大学生命科学学院, 山东青岛 266109

收稿日期:2015-10-10 出版日期:2016-02-28
通讯作者: 薛仁镐(1965-),男,吉林汪清人,教授,博士,主要从事植物分子生物学研究。
作者简介:吕兆勇(1986-),男,山东聊城人,在读硕士,主要从事植物分子生物学研究。
基金资助:
转基因生物新品种培育重大专项(2014ZX08010002-003-002);山东省自然科学基金项目(ZR2013CM025)

Cloning and Expression Analysis of Grape's Stress Inducible Promoter

LÜ Zhaoyong¹, ZHAO Chunmei², XUE Rengao²

1. Liaocheng People's Hospital, Liaocheng 252000, China;
2. College of Life Sciences, Qingdao Agricultural University, Qingdao 266109, China

Received:2015-10-10 Published:2016-02-28

摘要/Abstract

摘要： 为了研究葡萄抗逆基因(CAN70200.1)的表达特性,采用PCR技术从葡萄中克隆了CAN70200.1基因上游一段长度为1354 bp的启动子片段,命名为P_CAN。采用PlantCARE和PLACE启动子在线预测工具分析表明,P_CAN启动子序列具有CAAT-box、TATA-box基本的顺式作用元件和一些参与非生物胁迫、光和植物激素应答相关的顺式作用元件。为验证启动子的表达特性,将P_CAN启动子连接到pCAMBIA1391Z载体GUS基因的上游,构建成植物表达载体p1391Z-CAN,并通过农杆菌介导法转化烟草,经PCR鉴定,获得转基因植株。对转基因烟草植株进行逆境胁迫处理发现,在干旱处理120 min后,P_CAN启动子活性达到最强;而4℃低温处理30~60 min时,P_CAN启动子活性达到最强,表明P_CAN启动子具有低温和干旱胁迫诱导表达特性。

关键词: 葡萄, P_CAN启动子, 胁迫诱导表达, GUS检测

Abstract: To study the expression of grape stress tolerance gene (CAN70200.1),a 1 354 bp promoter fragment (named as P_CAN) upstream of the gene CAN70200.1 was isolated by using PCR technology.Promoter sequence was analyzed by the database of PlantCARE and PLACE.The result showed that the P_CAN sequence contained basic elements CAAT-box,TATA-box and some cis-acting elements that response to abiotic stresses,light and plant hormones.To verify the expression pattern of the promoter,the P_CAN fragment was fused with GUS reporter gene located on pCAMBIA1391Z to construct a plant expression vector p1391Z-CAN,followed by transformation into tobacco by Agrobacterium-meditated method.The expression activity of P_CAN promoter reached highest at 120 min after drought stress treatment or at 30-60 min under 4℃ cold treatment condition,indicated that the P_CAN promoter could express under the condition of treatments with cold and drought.

Key words: Grape, P_CAN promoter, Stress induction expression, GUS assay

中图分类号:

Q78
S565.1

吕兆勇, 赵春梅, 薛仁镐. 葡萄逆境胁迫诱导启动子的克隆及表达分析[J]. 华北农学报, 2016, 31(1): 77-82. doi: 10.7668/hbnxb.2016.01.013.

LÜ Zhaoyong, ZHAO Chunmei, XUE Rengao. Cloning and Expression Analysis of Grape's Stress Inducible Promoter[J]. ACTA AGRICULTURAE BOREALI-SINICA, 2016, 31(1): 77-82. doi: 10.7668/hbnxb.2016.01.013.

http://www.hbnxb.net/CN/Y2016/V31/I1/77

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