棉花根系总蛋白质提取及双向电泳方法的改良

doi:10.7668/hbnxb.2015.06.019

华北农学报 ›› 2015, Vol. 30 ›› Issue (6): 128-133. doi: 10.7668/hbnxb.2015.06.019

所属专题： 棉花；

棉花根系总蛋白质提取及双向电泳方法的改良

王曼, 刘连涛, 孙红春, 张永江, 宋世佳, 陈静, 成国鹏, 李存东

河北农业大学, 河北省作物生长调控实验室, 河北保定 071001

收稿日期:2015-07-12 出版日期:2015-12-28
通讯作者: 李存东(1964-),男,河北清河人,教授,博士,博士生导师,主要从事作物生理生态研究.
作者简介:王曼(1988-),女,河北保定人,硕士,主要从事棉花根系蛋白质组的研究.
基金资助:
国家自然科学基金项目(31171495;31304720);河北省自然科学基金项目(C2014204072);河北省重点基础研究项目(10960206D);高等学校博士学科点专项(20121302110001)

The Modified Method for Cotton Root Total Proteins Extraction and Two-dimensional Electrophoreses

WANG Man, LIU Lian-tao, SUN Hong-chun, ZHANG Yong-jiang, SONG Shi-jia, CHEN Jing, CHENG Guo-peng, LI Cun-dong

Agricultural University of Hebei, Hebei Key Laboratory of Crop Growth Regulation, Baoding 071001, China

Received:2015-07-12 Published:2015-12-28

摘要/Abstract

摘要： 对棉花根系蛋白的双向电泳提取技术进行改良,以获得更好的分离效果,为棉花根系蛋白质组学研究奠定基础.以鲁棉研28为材料,分别采用TCA/丙酮法、改良TCA/丙酮/SDS法、饱和酚-甲醇醋酸铵法这3种根系蛋白质提取方法,提取棉花幼苗根系总蛋白,并进行双向电泳进行蛋白质分离.在蛋白质含量、蛋白纯度和电泳图谱等方面对3种方法进行比较.利用饱和酚-甲醇醋酸铵提取法提取的棉花根系蛋白,其蛋白样品纯度高,SDS-PAGE电泳图谱清晰,蛋白点数量最多为601个点;TCA/丙酮法提取得到的蛋白总量最高约为7.53 mg/g,但样品纯度低,SDS-PAGE电泳图谱模糊,蛋白点数量最少为417个点.采用考马斯亮蓝染色,上样量为1 500 μg获得的凝胶图谱效果较好.总之,适合棉花根系蛋白质提取的方法为饱和酚-甲醇醋酸铵法,在考马斯亮蓝染色蛋白质上样量为1 500 μg时能获得优良的分离效果.

关键词: 棉花根系, 蛋白质提取, 双向凝胶电泳, 蛋白质组

Abstract: To explore an efficient and high resolution 2-DE procedure for cotton root proteomic analysis.Compared with three different protein extraction methods of cotton ( Gossypium hirsutum L.) root and analysis protein content,protein purity and electrophoresis.The results showed that the protein content of cotton root extracted by saturated powder was higher than that extracted by other methods and the electrophoresis strip of SDS-PAGE were clear;there were 601 clear cotton protein pots in a 2D-PAGE map.The TCA/acetone method got the highest protein quality and the lowest purity.The 2D-PAGE map was fuzzy and the number of protein pots was only 417.The loading quantity of 1 500 μg appeared to be better for 2-DE images with high definition when we used coomassie brilliant stain.In short,cotton root protein extraction method by saturated powder could get good separation effect.

Key words: Cotton root, Protein extraction, Two-dimensional electrophoresis, Proteomics

中图分类号:

S562.03

王曼, 刘连涛, 孙红春, 张永江, 宋世佳, 陈静, 成国鹏, 李存东. 棉花根系总蛋白质提取及双向电泳方法的改良[J]. 华北农学报, 2015, 30(6): 128-133. doi: 10.7668/hbnxb.2015.06.019.

WANG Man, LIU Lian-tao, SUN Hong-chun, ZHANG Yong-jiang, SONG Shi-jia, CHEN Jing, CHENG Guo-peng, LI Cun-dong. The Modified Method for Cotton Root Total Proteins Extraction and Two-dimensional Electrophoreses[J]. ACTA AGRICULTURAE BOREALI-SINICA, 2015, 30(6): 128-133. doi: 10.7668/hbnxb.2015.06.019.

http://www.hbnxb.net/CN/Y2015/V30/I6/128

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