甜蛋白大肠杆菌工程菌株发酵条件的优化及重组蛋白纯化方法的研究

doi:10.7668/hbnxb.2006.S3.005

华北农学报 ›› 2006, Vol. 21 ›› Issue (S3): 22-26. doi: 10.7668/hbnxb.2006.S3.005

甜蛋白大肠杆菌工程菌株发酵条件的优化及重组蛋白纯化方法的研究

陈忠军¹, 蔡恒², 路福平³, 李正英⁴, 杨志华¹

1. 内蒙古农业大学食品科学与工程学院, 内蒙古呼和浩特010018;
2. 南京工业大学制药与生命科学学院, 江苏南京210009;
3. 天津科技大学生物工程学院, 天津300222;
4. 内蒙古农业大学职业技术学院, 内蒙古包头014109

收稿日期:2006-11-14 出版日期:2006-12-31
作者简介:陈忠军(1971-), 女, 内蒙古呼和浩特人, 副教授, 博士, 主要从事食品科学研究与教学工作。
基金资助:
内蒙古自然科学基金(NO2006070105190)

Research of Fermentation Condition and Purification of Monellin in the Recombinant E.coli Stain

CHEN Zhong-jun¹, CAI Heng², LU Fu-ping³, LI Zheng-ying⁴, YANG Zhi-hua¹

1. College of Food Science and Engineering Inner Mongolia Agricultural University, Huhhot 010018, China;
2. College of Life Science and Pharmaccutical Engineering Nanjing University of Technology, Nanjing 210009, China;
3. College of Biotechnology Tianjin University of Science & Technology, Tianjin 300222, China;
4. Food Department of Vocational Technology College of Inner Mengolia Agricultural University, Baotou 014109, China

Received:2006-11-14 Published:2006-12-31

摘要/Abstract

摘要： 将带有monellin基因的重组分泌型表达载体pETMO转入大肠杆菌BL21(DE3)。得到重组工程菌株BLC01。研究不同的表达条件对甜蛋白表达水平的影响, 得到优化发酵条件：装液量为50ml/250ml三角瓶, 当培养液OD值达0.8时, 添加诱导剂IPTG至浓度为0.9mM, 32℃诱导5h。此时, 甜蛋白monellin表达量可高达细菌可溶性蛋白的45.2%。超声破碎细胞后, 利用热处理和酸处理结合的方法有效去除宿主蛋白, 透析后利用Sephadex G- 50进行柱层析, 得到纯化重组甜蛋白monellin。monellin基因在重组大肠杆菌中的表达产物具有生物活性。

关键词: 甜蛋白monellin, 重组菌株, 发酵条件, 纯化

Abstract: A expression vector pETMO harboring the single-chain monellin gene was transferred into E.coli BL21(DE3).In this study, the optimal condition of fermentation was obtained. The recombinant E.coli was grown at 37℃with shaking at 200 rpm. When OD600nm of the culture reached 0.8, IPTG was added to give a final concentration of 0.9 mM, and then incubated at 32℃for 5 h to over-express the recombinant monellin. Monellin was produced accounting for 45.2% of total soluble proteins. After broken up by ultrasonic the cell was treated by acid and heating to remove effectively the protein of host, the liquid was dialyzed and then sublimated by Sephadex G-50 to obtain pure monellin. The E. coli-expressed monellin has active.

Key words: Sweet protein monellin, Recombinant strain, Conditions of fermentation, Purification

中图分类号:

Q815

陈忠军, 蔡恒, 路福平, 李正英, 杨志华. 甜蛋白大肠杆菌工程菌株发酵条件的优化及重组蛋白纯化方法的研究[J]. 华北农学报, 2006, 21(S3): 22-26. doi: 10.7668/hbnxb.2006.S3.005.

CHEN Zhong-jun, CAI Heng, LU Fu-ping, LI Zheng-ying, YANG Zhi-hua. Research of Fermentation Condition and Purification of Monellin in the Recombinant E.coli Stain[J]. ACTA AGRICULTURAE BOREALI-SINICA, 2006, 21(S3): 22-26. doi: 10.7668/hbnxb.2006.S3.005.

http://www.hbnxb.net/CN/Y2006/V21/IS3/22

参考文献

[1] Danaby R.Sweet science overexpression of monellin in yeast[J].Nature Biotechnology,1997,(15):419-420.
[2] 洪薇,曹家树,刘小杰.甜蛋白的特性及其生物法生产[J].食品科学,2002,23(7):144-147.
[3] 范长胜.甜蛋白的开发与应用研究[J].食品与发酵工业,2001,27(12):50-54.
[4] 崔洪志,李敏,郭三堆.植物甜蛋白的研究进展[J].生物技术通报,1997,(2): 10-13.
[5] 钦传光,丁焰,汤国龙.新型非糖甜味剂研究进展[J]. 化学世界,1998,(8): 399-402.
[6] 范长胜,陈永青,李爽,等.超甜蛋白的基因工程及开发研究进展[J].工业微生物,1999,29( 1 )： 29-33.
[7] Sung -hou kim,Chul -Hee Kang,el al. Redesigning a sweet protein: increased stability and renaturability[J],Protein Engineering,1989,2(8):571 -579.
[8] 崔洪志,李敏,郭三堆,等.植物monellin基因的细菌化改造及在大肠杆菌中的表达[J].农业科学,1999,32(1): 58-62.
[9] 陈忠军,路福平,蔡恒,等.人工合成的单链甜蛋白 monellin基因在大肠杆菌中的高效表达[J].食品与发酵工业,2005,31(9):17-29.
[10] 汪家政,范明.蛋白质技术手册丨MJ.北京:科学出版社,2002.77-97.
[11] Quinones-Kochs MI,Schnell MJ. Mechanism of loss of protein gene expression vesicular stomatitis viruses[J],Virology,2002,287:427-435.
[12] 隨广超,胡美浩.影响大肠杆菌中外源基因表达的因素[J].生物化学与生物物理进展,1994,21 (2):128-132.
[13] Morris J A,Martension R,Deibier G,et al. Characterization of monellin,a protein that lasts sweet[J]. J Biol Chem.1973,248:534-539.
[14] 刘耀权,周文厚.基因工程与植物保护[J].内蒙古农业科技,1997,(4):29-30.
[15] 韩亚杰,祝建波,董玲,等.病毒介导的外源蛋白在植物中的表达[J].内蒙古农业科技,2006,(2)： 16-19.
[16] 董玲,李海龙,刘辉,等.提高植物疫苗外源蛋白表达量的研究进展[J].内蒙古农业科技,2006,(2)：27-29.

选择文件类型/文献管理软件名称

选择包含的内容

甜蛋白大肠杆菌工程菌株发酵条件的优化及重组蛋白纯化方法的研究

Research of Fermentation Condition and Purification of Monellin in the Recombinant E.coli Stain

PDF

可视化

被引次数

摘要/Abstract

引用本文

使用本文

参考文献

相关文章 15

编辑推荐

Metrics

本文评价

[1]	范会芬, 孙天杰, 苏伟华, 肖付明, 张洁, 王冬梅. 大豆GmWRKY50的抗体制备及其蛋白水平表达分析[J]. 华北农学报, 2021, 36(6): 28-34.
[2]	姜楠, 郑倩倩, 李倩文, 涂健, 宋祥军, 邵颖, 刘红梅, 祁克宗. *APEC毒力基因ygeG的原核表达载体构建、表达纯化及鉴定*[J]. 华北农学报, 2021, 36(5): 184-190.
[3]	雷其冬, 孙旭东, 徐慧妮. *拟南芥AtTCP4基因克隆及原核表达*[J]. 华北农学报, 2021, 36(5): 24-28.
[4]	郑艺超, 张昊, 赵丹, 王凤茹, 刘西岗, 郭琳. 拟南芥转录因子MYB54的体外纯化及功能初探[J]. 华北农学报, 2021, 36(4): 47-55.
[5]	孙丽静, 李倩影, 王培楠, 孙颖. 水稻组氨酸磷酸转运蛋白OsAHP2的表达及纯化[J]. 华北农学报, 2020, 35(4): 46-51.
[6]	贡莎莎, 孟庆玲, 乔军, 钟文强, 黄运福, 张国武, 陈英, 才学鹏. *少孢节丛孢菌XJ-A1几丁质酶基因AO-190的克隆、表达及其酶活性的测定*[J]. 华北农学报, 2018, 33(4): 67-74.
[7]	谢昆, 王靖, 王丽仙, 朱灵明, 尹建华, 叶青霞, 孙艳. 家蚕抗菌肽基因的克隆及重组蛋白的自诱导表达[J]. 华北农学报, 2018, 33(1): 33-38.
[8]	王敏, 刘媛媛, 周帆, 姜婷婷, 郑旭, 张靖, 时翠平, 邢继红, 董金皋. *灰葡萄孢BcKMO基因的原核表达分析*[J]. 华北农学报, 2017, 32(1): 68-72.
[9]	张飞燕, 王振华, 潘康成, 唐慧琴, 谷笑笑, 李伟. 藏猪IGF-1成熟肽基因的克隆及原核表达[J]. 华北农学报, 2017, 32(1): 80-85.
[10]	雷海英, 白凤麟, 刘建霞, 王志军. *玉米Zmcen基因的克隆、表达与生物信息学分析*[J]. 华北农学报, 2016, 31(3): 18-24.
[11]	王晓晔, 石博妹, 王英群, 李珣, 刘徳玉, 李铭, 李芳芳, 胡传活. 抗凋亡融合蛋白PTD-Bcl-xL原核表达载体的构建及表达纯化[J]. 华北农学报, 2016, 31(1): 1-7.
[12]	郭子平, 翟清华, 曾令锋, 邓西平, 杨淑慎. *小麦TaGAPC定点突变体基因载体构建及其原核表达*[J]. 华北农学报, 2016, 31(1): 46-50.
[13]	张萌, 万秀清, 乔婵, 李若, 李秀兰, 孙剑萍, 郭兆奎. 应用PCR技术分离纯化烟草野火病菌[J]. 华北农学报, 2015, 30(S1): 329-332.
[14]	杨婷, 廖美德, 贺玉广, 刘偲嘉. 淡紫拟青霉PL-HN-16促进植物生长活性因子的初步研究[J]. 华北农学报, 2015, 30(6): 170-175.
[15]	朱新产, 王倩文, 于群. 苦瓜几丁质酶的分离及生物学特征分析[J]. 华北农学报, 2015, 30(6): 182-187.

模态框（Modal）标题

选择文件类型/文献管理软件名称

选择包含的内容

甜蛋白大肠杆菌工程菌株发酵条件的优化及重组蛋白纯化方法的研究

Research of Fermentation Condition and Purification of Monellin in the Recombinant E.coli Stain

PDF

可视化

被引次数

摘要/Abstract

引用本文

使用本文

参考文献

相关文章 15

编辑推荐

Metrics

本文评价