棉花抗黄萎病相关基因筛选与亚克隆文库构建

doi:10.3321/j.issn:1000-7091.2006.z1.035

华北农学报 ›› 2006, Vol. 21 ›› Issue (S1): 147-150. doi: 10.3321/j.issn:1000-7091.2006.z1.035

所属专题： 棉花；生物技术；

棉花抗黄萎病相关基因筛选与亚克隆文库构建

王文生, 王省芬, 马峙英, 张桂寅

河北农业大学河北省作物种质资源重点实验室, 河北保定 071001

收稿日期:2006-09-11 出版日期:2006-12-31
作者简介:王文生(1981-)男，河北威县人，硕士研究生，主要从事棉花分子生物学研究工作。
基金资助:
国家“973”项目(2004CB117302-1);国家自然科学基金(30270848);教育部重点科技项目(204017)

Identification of BAC Clones Related with Verticillium Wilt Resistance Geneand Construction of Sub-clone Library

WANG Wen-sheng, WANG Xing-fen, MA Zhi-ying, ZHANG Gui-yin

Key Laboratory of Crop Germplasm Resources of Hebei Province, Agricultural University of Hebei, Baoding 071001, China

Received:2006-09-11 Published:2006-12-31

摘要/Abstract

摘要： 以黄萎病菌诱导下差异表达的棉花抗病相关基因片段PR8为探针，利用杂交方法，对优质、抗病海岛棉品种Pima90-53 BAC文库进行筛选。从30336个BAC克隆中筛选到含有PR8基因片段的4个阳性克隆，分别为127K13，128D14，169J3和178C5。用Sau3AI对其中的169J3克隆进行酶切，回收2～4 kb的DNA片段并连接到载体pUC118BamHI-BAP上，构建了含有该基因片段的亚克隆文库，共含有4224个克隆。经电泳检测，插入片段在1～3 kb，平均为2 kb。该亚克隆文库的构建为克隆PR8基因奠定了基础。

关键词: 棉花, 黄萎病, BAC, 亚克隆文库, 基因克隆

Abstract: In the study, the fragment PR8 related with Verticillium wilt resistance was used as a probe to screen Bacterial Artificial Chromosome (BAC) library of a Sea Island cotton, Pima90-53, with good quality and high Verticillium wilt resistance. Four positive BAC clones, 127K13, 128D14, 169J3 and 178C5, were detected from 30336 BAC clones. The BAC clone, 169J3, was digested with Sau3AI. After digestion, 2-4 kb fragments were collected and ligated with pUC118BamHI2BAP to construct a sub-clone library. The library contained 4224 clones, and inserts DNA ranged from 1 kb to 3 kb, averaged 2 kb. The sub-clone library could be used for obtaining the complete sequence of Verticillium wilt resistance gene.

Key words: Cotton, Verticillium wilt, BAC, Sub-clone library, Gene cloning

中图分类号:

S562.01

王文生, 王省芬, 马峙英, 张桂寅. 棉花抗黄萎病相关基因筛选与亚克隆文库构建[J]. 华北农学报, 2006, 21(S1): 147-150. doi: 10.3321/j.issn:1000-7091.2006.z1.035.

WANG Wen-sheng, WANG Xing-fen, MA Zhi-ying, ZHANG Gui-yin. Identification of BAC Clones Related with Verticillium Wilt Resistance Geneand Construction of Sub-clone Library[J]. ACTA AGRICULTURAE BOREALI-SINICA, 2006, 21(S1): 147-150. doi: 10.3321/j.issn:1000-7091.2006.z1.035.

http://www.hbnxb.net/CN/Y2006/V21/IS1/147

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