土壤中黄瓜棒孢叶斑病病原菌实时荧光定量PCR检测技术研究

doi:10.7668/hbnxb.2014.02.013

华北农学报 ›› 2014, Vol. 29 ›› Issue (2): 71-74. doi: 10.7668/hbnxb.2014.02.013

所属专题： 黄瓜；土壤肥料；

土壤中黄瓜棒孢叶斑病病原菌实时荧光定量PCR检测技术研究

高苇^1,2, 李宝聚², 王万立¹, 郝永娟¹, 石延霞²

1 天津市植物保护研究所天津 300381;
2 中国农业科学院蔬菜花卉研究所北京 100081

收稿日期:2013-06-13 出版日期:2014-04-28
通讯作者: 李宝聚(1967-),男,黑龙江饶河人,研究员,博士,主要从事蔬菜病害防治研究。
作者简介:高苇(1982-),女,辽宁大连人,助理研究员,博士,主要从事植物病原真菌学的研究。
基金资助:
大宗蔬菜产业技术体系建设专项(CARS-25)

Detection of Corynespora cassiicola in Soil with Real-time Quantitative PCR

GAO Wei^1,2, LI Bao-ju², WANG Wan-li¹, HAO Yong-juan¹, SHI Yan-xia²

1 Tianjin Institute of Plant Protection, Tianjin 300381, China;
2 The Institute of Vegetables and Flowers, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100081, China

Received:2013-06-13 Published:2014-04-28

摘要/Abstract

摘要： 筛选到应用于多主棒孢实时荧光定量PCR检测的特异性引物CIR5/CIF5,并建立了土壤中多主棒孢的实时荧光定量PCR检测技术。引物CIR5/CIF5能够从多主棒孢基因组DNA中特异性扩增出一条259 bp的片段,常规PCR检测中灵敏度可达10 fg/μL。利用实时荧光定量PCR检测模拟带菌土壤中的带菌量,结果证明该技术对土壤中多主棒孢的检测下限为1个孢子/g土壤,可以快速、准确地定量土壤中病原菌的孢子数目,为栽培前土壤中病原菌的监测预报提供有效的技术手段。

关键词: 多主棒孢, 实时荧光定量PCR, 土壤检测

Abstract: In this research, a specific primer pair CIR5 /CIF5 for C. cassiicola was developed, and Real-time PCR based specific detection method of this pathogen in soil was established. The primer pair gave a single amplifi- cation of 259 bp from C. cassiicola and could be distinguished from other soil-borne pathogen strains. The detection limit was 10 fg/μL in conventional PCR. The pathogen in soil could be detected by Real-time quantitative PCR, and the sensitivity was down to C. cassiicola DNA of 1 conidia/g. This Real-time quantitative PCR method could assist in the implementation of quarantine measures for prevention and control of Corynespora spot leaf.

Key words: Corynespora cassiicola, Real-time quantitative PCR, Soil detection

中图分类号:

S642.2

高苇, 李宝聚, 王万立, 郝永娟, 石延霞. 土壤中黄瓜棒孢叶斑病病原菌实时荧光定量PCR检测技术研究[J]. 华北农学报, 2014, 29(2): 71-74. doi: 10.7668/hbnxb.2014.02.013.

GAO Wei, LI Bao-ju, WANG Wan-li, HAO Yong-juan, SHI Yan-xia. Detection of Corynespora cassiicola in Soil with Real-time Quantitative PCR[J]. ACTA AGRICULTURAE BOREALI-SINICA, 2014, 29(2): 71-74. doi: 10.7668/hbnxb.2014.02.013.

http://www.hbnxb.net/CN/Y2014/V29/I2/71

参考文献

[1] Dixon L J, Schlub R L, Pernezny K, et al. Host specializa-tion and phylogenetic diversity of Corynespora cassiicola[J]. Phytopathology,2009,99(9):1015-1027.
[2] Ellis M B. Dematiaceous hyphomycetes[M]. Kew, UK:CABI,1971:372-373.
[3] 李宝聚,赵彦杰,于淑晶, 等. 2008 年秋季河北青县黄瓜棒孢叶斑病大发生[J]. 中国蔬菜,2008(11):51-52.
[4] 郝永娟,刘春艳,王勇, 等. 天津市蔬菜病害发生动态及防治对策[J]. 天津农业科学,2009,15(1):69-71.
[5] Miyamoto T, Ishii H, Seko T, et al. Occurrence of Corynespora cassiicola isolates resistant to boscalid on cucumberin Ibaraki Prefecture Japan[J]. Plant Pathology,2009,58(6):1144-1151.
[6] Kwon M K,Kang B R,Cho B H,et al. Occurrence of targetleaf spot disease caused by Corynespora cassiicola on cu-cumber in Korea[J]. Plant Pathology,2003,52(3):424.
[7] Erick D, Wolf D, Scott A. Disease cycle approach to plantdisease prediction[J]. Annual Review of Phytopathology,2007(45):203-220.
[8] Qi Y X, Zhang X, Pu J J, et al. Detection of Corynesporacassiicola in hevea rubber tree from China[J]. Australa-sian Plant Disease Notes,2007(2):153-155.
[9] Qi X Y, Zhang X, Pu J J, et al. Nested PCR assay for de-tection of corynespora leaf fall disease caused by Corynespora cassiicola[J]. Australasian Plant Pathology,2009,38(2):141-148.
[10] Raeder U, Broda P. Rapid preparation of DNA from fila-mentous fungi[J]. Letters in Applied Microbiology,1985(1):17-20.
[11] Volossiuk T, Robb E J, Nazar R N. Direct DNA extrac-tion for PCR-mediated assays of soil organisms[J]. ApplEnv Microbiol,1995,61(11):3972-3976.
[12] 豆亚亚,阮小蕾,袁月,等. 利用实时荧光 PCR 方法检测香蕉软腐细菌[J]. 园艺学报,2012,40(2):380 -388.
[13] 宋志强,王暄,林宇, 等. 土壤中南方根结线虫的实时荧光 PCR 检测和定量[J]. 植物保护学报, 2013, 40(3):255 -260.

[1]	付程程, 黄淮安, 周梦蝶, 钟天秀, 张向前, 陈曙, 解新明. 象草叶片和茎秆木质素合成相关基因的表达模式分析[J]. 华北农学报, 2020, 35(4): 87-95.
[2]	陈利达, 袁军海, 李磊, 石延霞, 柴阿丽, 谢学文, 李宝聚. 镰孢菌属实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用[J]. 华北农学报, 2019, 34(S1): 296-301.
[3]	李欣, 崔秀明, 刘迪秋, 孙恬, 郭爱玲, 陈军. 三七根腐病菌尖孢镰刀菌的Real-time PCR检测方法[J]. 华北农学报, 2019, 34(S1): 324-330.
[4]	宋建, 薛俊, 金凤媚, 孙海波, 张越, 王姝, 范寰, 周祥明, 陈锐. ToCV和TYLCV复合侵染番茄后部分病毒基因序列分析及实时荧光定量PCR分析[J]. 华北农学报, 2019, 34(2): 95-102.
[5]	李林杰, 刘萍, 马鹏, 王悦萦, 郭富城, 马晓霞, 周建华, 柏家林. 小反刍兽疫病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立[J]. 华北农学报, 2018, 33(S1): 84-88.
[6]	崔菲菲, 孟川, 王彦华, 赵建军, 陈雪平, 申书兴, 顾爱侠. 大白菜-结球甘蓝易位系实时荧光定量PCR内参基因的筛选[J]. 华北农学报, 2018, 33(5): 60-67.
[7]	杜方, 王婷, 樊俊苗, 张浩宇. 新铁炮百合朱丽叶器官差异基因表达分析[J]. 华北农学报, 2017, 32(5): 25-30.
[8]	毛玉梅, 李琴, 付鸣佳, 金华燕, 沈俊良, 钟雪晴. *蛹虫草CmKexin基因克隆和菌丝体中表达检测*[J]. 华北农学报, 2016, 31(4): 112-118.
[9]	徐麒麟, 何珲, 马容, 陈咨余, 易治鑫, 康波, 姜冬梅. *四川白鹅Calm1结构特征及其差异表达的研究*[J]. 华北农学报, 2016, 31(1): 128-133.
[10]	王惠哲, 邓强, 曹明明, 杨瑞环, 李淑菊. 黄瓜棒孢叶斑病菌的分子鉴定及rDNA-ITS序列分析[J]. 华北农学报, 2015, 30(3): 175-179.
[11]	范文斌, 刘永斌, 李长青. 瘤胃脂肪分解菌实时荧光定量PCR方法的构建[J]. 华北农学报, 2015, 30(1): 154-157.
[12]	徐维华, 郑秋玲, 刘万好, 沙玉芬, 范书亭, 唐美玲. FT/TFL类基因在山葡萄雌雄花中的表达分析[J]. 华北农学报, 2014, 29(S1): 50-53.
[13]	张梅娟, 沙伟, 刘博, 安洪雪, 宋璐. 毛尖紫萼藓类泛素蛋白基因的克隆与表达分析[J]. 华北农学报, 2014, 29(6): 58-62.
[14]	敖妍, 赵磊磊, 姜常玉, 马履一. 文冠果不同花朵类型植株miRNA表达差异分析[J]. 华北农学报, 2014, 29(5): 16-22.
[15]	秦彤, 王皓宇, 郝海生, 王栋, 杜卫华, 朱化彬. 日粮精粗比对围产期奶牛乳腺内参基因表达的影响[J]. 华北农学报, 2013, 28(4): 75-78.

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