口蹄疫病毒O/HN/93疫苗株的拯救及病毒活性鉴定

doi:10.7668/hbnxb.2010.03.008

华北农学报 ›› 2010, Vol. 25 ›› Issue (3): 32-37. doi: 10.7668/hbnxb.2010.03.008

口蹄疫病毒O/HN/93疫苗株的拯救及病毒活性鉴定

曹伟军¹, 李平花², 白兴文², 卢曾军², 孙普², 刘在新²

1. 中国农业科学院, 兰州兽医研究所, 家畜疫病病原生物学国家重点实验室, 农业部畜禽病毒学重点开放实验室, 国家口蹄疫参考实验室, 甘肃兰州 730046;
2. 中国农业科学院, 兰州兽医研究所, 家畜疫病病原生物学国家重点实验室, 农业部畜禽病毒学重点开放实验室, 国家口蹄疫参考实验室, 甘肃兰州 730046

收稿日期:2010-04-21 出版日期:2010-06-28
通讯作者: 刘在新(1964－)，男，甘肃景泰人，研究员，主要从事动物病毒免疫学和分子生物学研究。
作者简介:曹伟军(1983-),男,甘肃天水人,硕士,主要从事口蹄疫反向遗传学研究.
基金资助:
国家支撑计划(2006BAD06A12);国家“973”项目(2005CB523201)

Rescue and Identification of Virus Activity of Foot-and-Mouth Disease Virus Strain O/HN/93 from Full-length cDNA Clone

CAO Wei-jun¹, ², LI Ping-hua², BAI Xing-wen², LU Zeng-jun², SUN Pu²

1. State Key Laboratory of Veterinary Etiological Biology, Key Laboratory of Animal Virology of Ministry of Agricultural, National Foot-and-Mouth Disease Reference Laboratory, Lanzhou Veterinary Research Institute of Chinese Academy of Agriculture Sciences, Lanzhou 730046, China;
2. Veterinary College of Gansu Agricultural University, Lanzhou 730070, China

Received:2010-04-21 Published:2010-06-28

摘要/Abstract

摘要： 利用定点突变方法,构建含有预期突变的口蹄疫病毒O/HN/93株全长cDNA克隆,将全长cDNA的重组质粒线化后,与表达T7 RNA聚合酶的真核质粒pcDNAT7P共转染BHK-21细胞,转染细胞盲传至第3代50 h后出现典型致细胞病变效应(CPE),第4代10 h出现典型的CPE。对收获的病毒分别用RT-PCR、分子标签测序、间接免疫荧光和电镜观察等进行鉴定,均证实成功拯救到了O/HN/93株FMDV。成功获得O/HN/93株的感染性分子克隆,为进一步研究抗原谱广、免疫原性好的候选疫苗株奠定了骨架基础。

关键词: 口蹄疫病毒, 疫苗株, 感染性cDNA克隆, 病毒拯救

Abstract: We construct containing the expected mutations in foot-and-mouth disease virus( FMDV) vaccine strain O/HN/93 full-length cDNA clone by using site-directed mutagenesis.The recombinant plasmids containing O/HN/93 full-length genome were linearized with Not I enzyme and cotransfected into BHK-21 cells with pcDNAT7P plasmids that could express T7 RNA polymerase to rescue virus.The transfected cells were serily passaged, and the third passage showed apparent cytopathogenicity effect( CPE) within 50 h, the CPE were observed after 10 h in the fourth passage.The results of the RT-PCR, indirect immunofluorescence, electron microscope confirmed the success of the rescue out of FMDV O/HN/93 strain.The recovered virus contained genetic tags.Successfully obtained infectious full-length cDNA clone of O/HN/93 strain, It lay a foundation for further study of the candidate vaccine strain which covers a wider spectrum of antigens over pandemic strain．

Key words: Foot-and-mouth disease virus( FMDV), Vaccine strain, Infectious cDNA clones, Virus rescue

中图分类号:

曹伟军, 李平花, 白兴文, 卢曾军, 孙普, 刘在新. 口蹄疫病毒O/HN/93疫苗株的拯救及病毒活性鉴定[J]. 华北农学报, 2010, 25(3): 32-37. doi: 10.7668/hbnxb.2010.03.008.

CAO Wei-jun,, LI Ping-hua, BAI Xing-wen, LU Zeng-jun, SUN Pu, LIU Zai-xin. Rescue and Identification of Virus Activity of Foot-and-Mouth Disease Virus Strain O/HN/93 from Full-length cDNA Clone[J]. ACTA AGRICULTURAE BOREALI-SINICA, 2010, 25(3): 32-37. doi: 10.7668/hbnxb.2010.03.008.

http://www.hbnxb.net/CN/Y2010/V25/I3/32

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