杀虫蛋白基因<em>cry8</em>Fa2的克隆及在Bt无晶体突变株中的表达

doi:10.7668/hbnxb.2011.03.004

华北农学报 ›› 2011, Vol. 26 ›› Issue (3): 16-20. doi: 10.7668/hbnxb.2011.03.004

所属专题： 生物技术；

杀虫蛋白基因cry8Fa2的克隆及在Bt无晶体突变株中的表达

臧大康, 郑桂玲, 周洪旭, 张媛, 李国勋, 李长友

青岛农业大学无脊椎动物细胞培养和细胞工程中心, 山东青岛 266109

收稿日期:2011-02-12 出版日期:2011-06-28
通讯作者: 李长友(1969- )，男，黑龙江佳木斯人，教授，主要从事害虫生物防治研究。
作者简介:臧大康(1984- ),男,山东招远人,硕士研究生,主要从事害虫生物防治研究.
基金资助:
国家"973"计划项目(2009CB118902);青岛市科技计划项目(09-1-3-61-jch)

Cloning of cry8Fa2 Gene and Its Expression in Bacillus thuringiensis Acrystalliferous Mutant Strain

ZANG Da-kang, ZHENG Gui-ling, ZHOU Hong-xu, ZHANG Yuan, LI Guo-xun, LI Chang-you

A Center for Advanced Invertebrate Cell Culture and Cell Engineering,Qingdao Agricultural University, Qingdao 266109,China

Received:2011-02-12 Published:2011-06-28

摘要/Abstract

摘要： 以本实验室分离的Bt菌株B-DLL质粒DNA为模板,利用cry8类基因特异性引物JJX和JJX3扩增出3.kb的片段,将该片段插入克隆载体pMD 18-T中,筛选获得一个含新基因的克隆pMD-cry8new.序列测定表明,该基因编码区为3 2 bp,编码的蛋白质由1 174个氨基酸残基组成,理论分子量为133.0 kDa,等电点为pH4.69,为弱酸性蛋白.该基因核苷酸序列已在GenBank登录(Accession number:HQ174208),编码的氨基酸序列与Cry8Fa1的同源性最高达99.8%,被国际Btδ-内毒素命名委员会正式命名为Cry8Fa2.将cry8Fa2基因插入Bt表达载体pSXY422b中,电击导入Bt无晶体突变株HD-73-中,获得重组Bt工程菌HD73-Cry8Fa2,该工程菌能形成伴孢晶体,并表达130 kDa 的蛋白.生物测定结果表明,该基因表达产物对暗黑鳃金龟和华北大黑鳃金龟幼虫均不具有杀虫活性.

关键词: Bt, cry8Fa2基因, 基因克隆, 蛋白表达

Abstract: The 3.5 kb fragments was amplified by PCR using a pair of Bt cry8-type genes special primers,JJX5 and JJX3,and inserted into vector pMD 18-T,the new recombinant plasmid,pMD-cry8new,was isolated and obtained.Nucleic acid sequence analysis showed that this gene was 3 525 base pairs encoding 1 174 amino acids,which were homolog of 99.8% compared with Cry8Fal,the molecular weight of the protein was 133.05 kDa with isoelectric point pH 4.69.This gene sequence had been registered in GenBank(accession number was HQ174208),and named Cry8Fa2 as a novel gene by Bacillus thuringiensis Delta Endotoxin Nomenclature Committee.The cry8Fa2 gene could be formed parasporal crystal and expressed as a 130 kDa protein in Bt acrystalliferous mutant strain HD-73-.Bioassay result showed the expression product of cry8Fa2 gene was not toxic to the larvae of Holotrichia parallela and H.oblita.

Key words: Bacillus thuringiensis, cry8Fa2 gene, Gene cloning, Protein expression

中图分类号:

臧大康, 郑桂玲, 周洪旭, 张媛, 李国勋, 李长友. 杀虫蛋白基因cry8Fa2的克隆及在Bt无晶体突变株中的表达[J]. 华北农学报, 2011, 26(3): 16-20. doi: 10.7668/hbnxb.2011.03.004.

ZANG Da-kang, ZHENG Gui-ling, ZHOU Hong-xu, ZHANG Yuan, LI Guo-xun, LI Chang-you. Cloning of cry8Fa2 Gene and Its Expression in Bacillus thuringiensis Acrystalliferous Mutant Strain[J]. ACTA AGRICULTURAE BOREALI-SINICA, 2011, 26(3): 16-20. doi: 10.7668/hbnxb.2011.03.004.

http://www.hbnxb.net/CN/Y2011/V26/I3/16

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