新西兰白兔γ-干扰素在昆虫细胞中的表达及其活性测定

doi:10.7668/hbnxb.2010.03.003

华北农学报 ›› 2010, Vol. 25 ›› Issue (3): 9-13. doi: 10.7668/hbnxb.2010.03.003

新西兰白兔γ-干扰素在昆虫细胞中的表达及其活性测定

王芳¹, 胡波¹, 任雪枫², 范志宇¹, 张则斌¹, 徐为中¹, 何孔旺¹

1. 江苏省农业科学院, 兽医研究所, 农业部动物疫病免疫与诊断重点开放实验室, 国家兽用生物制品工程技术研究中心, 江苏南京 210014;
2. 江苏省动物疫病预防控制中心, 江苏南京 210036

收稿日期:2010-04-19 出版日期:2010-06-28
作者简介:王芳(1972-),女,新疆伊宁人,副研究员,博士,主要从事畜禽传染病免疫机理及防控方法研究.
基金资助:
农业部公益性行业科研专项(nyhyzx07-040);现代农业产业技术体系建设专项资金资助项目(nycytx-44)

Expression of IFN-γ of New Zealand Rabbit in Insect Cells and Its Antiviral Activity

WANG Fang¹, HU Bo¹, REN Xue-feng², FAN Zhi-yu¹, ZHANG Ze-bin¹, XU Wei-zhong¹, HE Kong-wang¹

1. Institute of Veterinary Medicine, Jiangsu Academy of Agricultural Sciences, Key Laboratory of Animal Diseases Diagnostic and Immunology, Ministry of Agriculture, National Center for Engineering Research of Veterinary Bio-products, Nanjing 210014, China;
2. Jiangsu Animal Disease Control Center, Nanjing 210036, China

Received:2010-04-19 Published:2010-06-28

摘要/Abstract

摘要： 用RT-PCR方法对ConA刺激后的新西兰白兔外周血淋巴细胞(PBMC)扩增家兔γ-干扰素(IFN-γ)基因并进行测序,测序结果显示,与GenBank公布的序列核苷酸同源性达到99.4%～99.6%,氨基酸同源性为98.8%～99.4%;然后通过克隆、转化将家兔γ-干扰素基因转入转移载体pFastBac^TM1,得到重组转移载体pFastBac^TM1-IFN-γ,用pFastBac^TM1-IFN-γ转化含有穿梭载体Bacmid的大肠杆菌DH10Bac感受态细胞,经筛选得到重组穿梭载体Bacmid-IFN-γ,用此质粒转染Sf9昆虫细胞,得到重组病毒rAcV-Bac-IFN-γ,经RT-PCR鉴定,结果显示重组IFN-γ在Sf9昆虫细胞中得到表达。用兔IFN-γELISA试剂盒测得重组兔IFN-γ的浓度为1 950 pg/mL。细胞病变抑制法结果显示,重组兔IFN-γ在MDCK上显示了较高的抗病毒活性,并测得重组兔IFN-γ的活性约为5.12×105 U/mg。

关键词: 家兔, &gamma, -干扰素, 克隆, 重组杆状病毒

Abstract: The cDNA specific for New Zealand rabbit IFN-γ was amplified by reverse transcription polymerase from the rabbit peripheral blood lymphocytes( PBMC) stimulated by Concavadin A and sequenced.The sequencing results indicated that the IFN-γ gene was complete,and the homology of nucleotide and amino acid sequence of rabbit IFN-γ comparing the reference sequence in GenBank are 99.4%-99.6% and 98.8%-99.4%.The rabbit IFN-γ gene then was inserted into the transferring vector pFastBac^TMTMTM5 U/mg．

Key words: Rabbit, IFN-γ, Cloning, Recombinant baculovirus

中图分类号:

Q786

王芳, 胡波, 任雪枫, 范志宇, 张则斌, 徐为中, 何孔旺. 新西兰白兔γ-干扰素在昆虫细胞中的表达及其活性测定[J]. 华北农学报, 2010, 25(3): 9-13. doi: 10.7668/hbnxb.2010.03.003.

WANG Fang, HU Bo, REN Xue-feng, FAN Zhi-yu, ZHANG Ze-bin, XU Wei-zhong, HE Kong-wang. Expression of IFN-γ of New Zealand Rabbit in Insect Cells and Its Antiviral Activity[J]. ACTA AGRICULTURAE BOREALI-SINICA, 2010, 25(3): 9-13. doi: 10.7668/hbnxb.2010.03.003.

http://www.hbnxb.net/CN/Y2010/V25/I3/9

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