植物病原菌诱导表达载体构建及在烟草中的瞬时表达研究

doi:10.3969/j.issn.1000-7091.2013.04.008

华北农学报 ›› 2013, Vol. 28 ›› Issue (4): 41-45. doi: 10.3969/j.issn.1000-7091.2013.04.008

所属专题： 烟草；

植物病原菌诱导表达载体构建及在烟草中的瞬时表达研究

欧阳乐军, 黄真池, 沙月娥, 曾富华

湛江师范学院生命科学与技术学院, 广东湛江 524048

收稿日期:2013-06-20 出版日期:2013-08-28
通讯作者: 曾富华(1952－ )，男，湖南浏阳人，教授，博士，主要从事植物分子生物学研究
作者简介:欧阳乐军(1976－ )，男，湖南南县人，助理研究员，博士，主要从事植物基因工程育种研究
基金资助:
国家“十二五”科技计划项目(2012BAD19B08);国家星火计划项目(2011GA780067;2011GA780057);广东高校边缘热带特色植物资源工程技术开发中心项目(GCZX-B1002);广东省自然科学基金项目(S2012010008737;10152404801000005;10452404801004328);广东省科技计划项目(2012A020602108);湛江市科技攻关项目(2011C3104010)

Construction of a Plant Inducible Expression Vector and Its Transient Expression in Tobacco

OUYANG Le-jun, HUANG Zhen-chi, SHA Yue-e, ZENG Fu-hua

School of Life Science and Technology, Zhanjiang Normal University, Zhanjiang 524048, China

Received:2013-06-20 Published:2013-08-28

摘要/Abstract

摘要： 根据GenBank中植物病原物诱导型启动子碱基序列设计引物,以烟草基因组DNA为模板,扩增PPP3启动子。用PPP3替换pCAMBIA1301中与gus基因相连的35S启动子,构建重组质粒pCOMBIA+PPP3+gus后导入农杆菌GV3101。通过农杆菌介导的瞬时表达技术将受PPPs控制的gus基因导入烟草。分别接种青枯菌和水杨酸24 h后,烟草叶片中检测到gus基因转录效率分别提高了27.94,17.69倍。表明PPP3启动子具有本底表达水平低、诱导表达活性强的特点。

关键词: 诱导型启动子, 瞬时表达, 定量PCR

Abstract: According to the sequences of pathogen- inducible plant promoters PPP3 at GenBank，PPP3 promot- ers was cloned from tobacco genome．It was used to replace cauliflower mosaic virus 35S promoter of pCAM- BIA1301．The recombinant plasmid was used to transform Agrobacterium tumefaciens GV3101．The inducibility of the PPP3 promoters in tobacco leaf was evaluated by Agrobacterium tumefaciens- transient genetic transformation as- sye．Real- time quantitative PCR was used to screen the PPP3 promoters with high inducible expression．The results showed that the gus transcript level under the control of PPP3 promoters increased respectively 27．94 fold and 17. 69 fold after inoculation with Ralstonia solanacearum and SA．The PPP3 promoter had the advantages such as low basal activity and high expression activity．

Key words: Inducible expression Promoter, Transient expression, Real- time quantitative PCR

中图分类号:

Q786

欧阳乐军, 黄真池, 沙月娥, 曾富华. 植物病原菌诱导表达载体构建及在烟草中的瞬时表达研究[J]. 华北农学报, 2013, 28(4): 41-45. doi: 10.3969/j.issn.1000-7091.2013.04.008.

OUYANG Le-jun, HUANG Zhen-chi, SHA Yue-e, ZENG Fu-hua. Construction of a Plant Inducible Expression Vector and Its Transient Expression in Tobacco[J]. ACTA AGRICULTURAE BOREALI-SINICA, 2013, 28(4): 41-45. doi: 10.3969/j.issn.1000-7091.2013.04.008.

http://www.hbnxb.net/CN/Y2013/V28/I4/41

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