盾叶半夏凝集素基因的克隆及功能分析

doi:10.7668/hbnxb.2016.03.005

华北农学报 ›› 2016, Vol. 31 ›› Issue (3): 32-37. doi: 10.7668/hbnxb.2016.03.005

所属专题： 生物技术；

盾叶半夏凝集素基因的克隆及功能分析

杨在君¹, 刘玲玲^1,2, 彭正松¹

1. 西华师范大学生命科学学院, 西南野生动植物资源保护教育部重点实验室, 四川南充 637009;
2. 重庆大学生物工程学院, 生物流变科学与技术教育部重点实验室, 重庆 400044

收稿日期:2016-03-12 出版日期:2016-06-28
作者简介:杨在君(1981-),男,四川南充人,副教授,博士,硕士生导师,主要从事植物资源与分子生物学研究。杨在君、刘玲玲为同等贡献作者。
基金资助:
西华师范大学博士科研启动项目(11B017)

Cloning and Functional Analysis of the Lectin Gene in Pinellia peltata

YANG Zaijun¹, LIU Lingling^1,2, PENG Zhengsong¹

1. College of Life Science, China West Normal University, Key Laboratory of Southwest China Wildlife Resources Conservation, Ministry of Education, Nanchong 637009, China;
2. Bioengineering College, Chongqing University, Key Laboratory of Biorheological Science and Technology, Ministry of Education, Chongqing 400044, China

Received:2016-03-12 Published:2016-06-28

摘要/Abstract

摘要： 为克隆盾叶半夏凝集素基因,并对其功能进行分析。采用RACE技术从盾叶半夏中克隆得到盾叶半夏凝集素基因的全长cDNA序列,命名为ppl。同时,构建了ppl基因的原核表达载体,并成功实现了33kDa重组蛋白在E.coli BL21中的表达。纯化后的重组蛋白PPL用于凝血和体外抗癌试验。该基因的全长cDNA序列为1504bp,其中开放性阅读框(ORF)813 bp,编码270个氨基酸,具有3个甘露糖结合识别位点。PPL具有凝血活性,这种凝血活性可受甘露糖抑制。PPL对人鼻咽癌细胞(CNE)、人宫颈癌细胞(Hela)及人乳腺癌细胞(Bcap-37)的生长均具有抑制作用,其中对Hela细胞的抑制效果最好。为进一步研究PPL蛋白的功能奠定了理论基础。

关键词: 盾叶半夏, 凝集素, 基因克隆, 功能分析

Abstract: To clone a lectin gene from Pinellia peltata and analyze its bioactivity.A lectin gene,designated as ppl, was cloned by using RACE in Pinellia peltata .The open reading frame (ORF) of P.peltata lectin (ppl) was constructed into the pET-28a vector.A recombinant protein about 33 kDa in the Escherichia coli BL21 was induced.The purified recombinant protein was used blood coagulation experiment and anticancer experiment in vitro .The full-length cDNA of ppl was 1 504 bp,and contained an 813 bp ORF with a deduced amino acid sequence of 270 residues.The putative PPL protein contained three mannose binding site.The PPL had clotting activity,and this activity could be inhibited by mannose.The result of anticancer experiment in vitro showed that the PPL could inhibit the growth of nasopharyngeal carcinoma cell (CNE),human cervical carcinoma cell (Hela) and human breast cancer cell (Bcap-37).These results were useful for further determination of the function of P.peltata lectin protein (PPL).

Key words: Pinellia peltata, Lectin, Gene cloning, Functional analysis

中图分类号:

杨在君, 刘玲玲, 彭正松. 盾叶半夏凝集素基因的克隆及功能分析[J]. 华北农学报, 2016, 31(3): 32-37. doi: 10.7668/hbnxb.2016.03.005.

YANG Zaijun, LIU Lingling, PENG Zhengsong. Cloning and Functional Analysis of the Lectin Gene in Pinellia peltata[J]. ACTA AGRICULTURAE BOREALI-SINICA, 2016, 31(3): 32-37. doi: 10.7668/hbnxb.2016.03.005.

http://www.hbnxb.net/CN/Y2016/V31/I3/32

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