表达禽流感<em>HA</em>基因的重组马立克氏病病毒的构建

doi:10.7668/hbnxb.2007.04.039

华北农学报 ›› 2007, Vol. 22 ›› Issue (4): 168-171. doi: 10.7668/hbnxb.2007.04.039

所属专题： 生物技术；

表达禽流感HA基因的重组马立克氏病病毒的构建

周雪媚^1,2, 霍惠玲², 佘锐萍¹, 李永清³, 冯国民⁴, 章振华³, 王宏俊³

1. 中国农业大学动物医学院, 北京 100094;
2. 河北省兽药监察所, 河北石家庄 050051;
3. 北京市农林科学院畜牧兽医研究所, 北京 100089;
4. 江西农业大学动物医学院, 江西南昌 330045

收稿日期:2007-04-12 出版日期:2007-08-28
通讯作者: 霍惠玲(1966-)，女，河北石家庄人，硕士，研究员，主要从事动物病毒学和免疫学方面的研究；佘锐萍(1957-)，女，湖北宜城人，博士，教授，主要从事兽医病理学和黏膜免疫学方面的研究。
作者简介:周雪媚(1975-)，女，湖北蕲春人，博士，主要从事动物病毒学和免疫学方面的研究。
基金资助:
河北省自然科学基金(C2005000654)

Construction of Recombinant Marek’s Disease Virus Expressing Avian Influenza Virus HA Gene

ZHOU Xue-mei^1,2, HUO Hui-ling², SHE Rui-ping¹, LI Yong-qing³, FENG Guo-min⁴, ZHANG Zhen-hua³, WANG Hong-jun³

1. Department of Veterinary Medicine, China Agricultural University, Beijing 100094, China;
2. Hebei Province Institute of Veterinary Drug Control, Shijiazhuang 050051, China;
3. Institute of Animal Husbandry and Veterinary Medicine, Beijing Academy of Agriculture and Forestry Sciences, Beijing 100089, China;
4. Department of Veterinary Medicine, Jiangxi Agricultural University, Nanchang 330045, China

Received:2007-04-12 Published:2007-08-28

摘要/Abstract

摘要： 本试验首先用RT-PCR方法扩增出H9N2亚型禽流感病的HA基因，大小约1700 bp，将其克隆到真核表达载体pcDNA中，并将该真核表达载体上的CMV启动子控制的含LacZ和HA基因表达盒克隆人马立克氏病病毒US2基因中，成功的构建了马立克氏病病毒的转移载体。然后，通过脂质体方法转染已感染马立克氏病病毒的鸡胚成纤维细胞(CEF)中，通过蓝斑筛选获得重组病毒。该重组病毒通过PCR方法鉴定证实其基因组中含有完整的HA基因。免疫酶反应和Western-blot证实重组病毒表达了禽流感HA蛋白，表达的HA蛋白具有血凝活性。

关键词: 禽流感病毒, HA基因, 重组马立克氏病病毒

Abstract: In this study, a 1.7 kb DNA fragment encoding the HA gene of Avian influenza virus H9N2 was obtained by RT-PCR and the sequence was cloned into the vector of pcDNA; Then the expression cassette including the HA gene of AIV and LacZ gene of Ecoli controlled by CMV promoter, were inserted into US2 gene of MDV to give a transfer vector. The complex of pUS2 HA and DOTAP was transfected into CEF infected MDV. The recombinant MDV were selected and purified by blue plague. The complete HA gene inserted into MDV was detected by PCR. Western-blot and immunostaining result demonstrated tHAt HA protein of AIV was expressed by recombinant MDV.

Key words: Avian influenza virus, HA gene, Recombinant marek’s disease virus

中图分类号:

S852.65

周雪媚, 霍惠玲, 佘锐萍, 李永清, 冯国民, 章振华, 王宏俊. 表达禽流感HA基因的重组马立克氏病病毒的构建[J]. 华北农学报, 2007, 22(4): 168-171. doi: 10.7668/hbnxb.2007.04.039.

ZHOU Xue-mei, HUO Hui-ling, SHE Rui-ping, LI Yong-qing, FENG Guo-min, ZHANG Zhen-hua, WANG Hong-jun. Construction of Recombinant Marek’s Disease Virus Expressing Avian Influenza Virus HA Gene[J]. ACTA AGRICULTURAE BOREALI-SINICA, 2007, 22(4): 168-171. doi: 10.7668/hbnxb.2007.04.039.

http://www.hbnxb.net/CN/Y2007/V22/I4/168

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