鹅坦布苏病毒非结构蛋白NS1的原核表达及纯化

doi:10.3969/j.issn.1000-7091.2012.06.003

华北农学报 ›› 2012, Vol. 27 ›› Issue (6): 11-14. doi: 10.3969/j.issn.1000-7091.2012.06.003

鹅坦布苏病毒非结构蛋白NS1的原核表达及纯化

赵冬敏, 黄欣梅, 刘宇卓, 张敬峰, 韩凯凯, 谢星星, 周晓波, 李银

江苏省农业科学院兽医研究所, 农业部兽用生物制品工程技术重点实验室, 国家兽用生物制品工程技术研究中心, 江苏南京 210014

收稿日期:2012-08-10 出版日期:2012-12-28
通讯作者: 李银(1966-)，男，内蒙古赤峰人，研究员，博士，主要从事家禽疫病流行病学和防治研究。
作者简介:赵冬敏(1982-)，女，山东兖州人，助理研究员，博士，主要从事家禽重大疫病流行病学和致病分子机制的研究。
基金资助:
江苏省自然科学基金项目(BK2012376);国家自然科学基金项目(31172345);江苏省农业科技自主创新资金项目(cx(11)4039)

Prokaryotic Expression and Purification of Nonstructural Protein NS1 of Goose Tembusu Virus

ZHAO Dong-min, HUANG Xin-mei, LIU Yu-zhuo, ZHANG Jing-feng, HAN Kai-kai, XIE Xing-xing, ZHOU Xiao-bo, LI Yin

Institute of Veterinary Science, Jiangsu Academy of Agricultural Science, Key Laboratory of Veterinary Biologicals Engineering and Technology, Ministry of Agriculture, National Center for Engineering Research of Veterinary Bio-products, Nanjing 210014, China

Received:2012-08-10 Published:2012-12-28

摘要/Abstract

摘要： 根据鹅坦布苏病毒JS804株非结构蛋白NS1基因序列,设计1对特异性引物,利用PCR方法扩增得到完整的NS1基因,并将其克隆至原核表达载体pET28a和pET32a上,构建出重组表达质粒pET28a-NS1和pET32a-NS1,转化至BL21(DE3)中,经IPTG诱导得到NS1融合蛋白(His-NS1),其分子质量约分别为44,58 kDa,均在诱导后6 h达到表达量高峰。分析显示,2种融合蛋白均以包涵体形式存在,包涵体经过变性和复性后均可获得单一、高表达量的目的蛋白,为进一步开展关于鹅坦布苏病毒NS1蛋白的研究奠定了基础。

关键词: 鹅坦布苏病毒, NS1蛋白, 原核表达

Abstract: The goose tembusu virus JS804 strain non-structural protein NS1 gene was amplified by PCR with the specific primers designed on the basis of NS1 gene and then was inserted into the prokaryotic vector pET28a and pET32a for the construction of recombinant expression plasmid pET28a-NS1 and pET32a-NS1． Then pET28a-NS1 and pET32a-NS1 were transformed respectively into Escherichia coli BL21 ( DE3). The recombinant protein NS1s ( His-NS1) were obtained with the induction of IPTG and the molecular weight of the fusion protein was 44 kDa and 58 kDa respectively． After 6 h induction by IPTG， the yield of fusion proteins reached peaks． The analysis showed that two fusion proteins were expressed in Escherichia coli into inclusion bodies． The fusion protein was purified to pure and high-level proteins by extracting the inclusion bodies with urea． The results laid the foundation for the further studies on the NS1 protein of goose tembusu virus．

Key words: Goose tembusu virus, NS1 protein, Prokaryotic expression

中图分类号:

赵冬敏, 黄欣梅, 刘宇卓, 张敬峰, 韩凯凯, 谢星星, 周晓波, 李银. 鹅坦布苏病毒非结构蛋白NS1的原核表达及纯化[J]. 华北农学报, 2012, 27(6): 11-14. doi: 10.3969/j.issn.1000-7091.2012.06.003.

ZHAO Dong-min, HUANG Xin-mei, LIU Yu-zhuo, ZHANG Jing-feng, HAN Kai-kai, XIE Xing-xing, ZHOU Xiao-bo, LI Yin. Prokaryotic Expression and Purification of Nonstructural Protein NS1 of Goose Tembusu Virus[J]. ACTA AGRICULTURAE BOREALI-SINICA, 2012, 27(6): 11-14. doi: 10.3969/j.issn.1000-7091.2012.06.003.

http://www.hbnxb.net/CN/Y2012/V27/I6/11

参考文献

[1] 黄欣梅，李银，赵冬敏，等．新型鹅黄病毒JS804 毒株的分离与鉴定[J]．江苏农业学报， 2011， 27( 2) : 354-360．
[2] 苏敬良．鸭的新型黄病毒BYD 引起的产蛋下降综合征[J]．兽医导刊， 2011( 4) : 27-29．
[3] Cao Z，Zhang C，Liu Y， et al． Tembusu virus in ducks，China[J]． Emerg Infect Dis， 2011， 17( 10) : 1873-1875．
[4] 张大丙．鸭出血性卵巢炎的研究进展[J]．中国家禽， 2011， 33( 14) : 37-38．
[5] Yun T，Ye W，Ni Z，et al． Identification and molecular characterization of a novel flavivirus isolated from Pekin ducklings in China[J]． Vet Microbiol， 2012， 157( 3 /4) : 311-319．
[6] 姬希文，李雪松，李国新，等．鸭坦布苏病毒E 蛋白中和性单克隆抗体的制备[J]．中国家禽，2012，34( 4) :25-32．
[7] MuylaeRTI R，Galler R，Rice C M． Genetic analysis of the yellow fever virus NS1 protein: identification of a temperature-sensitive mutation which blocks RNA accumulation[J]． J Virol， 1997， 71( 1) : 291-298．
[8] Lindenbach B D，Rice C M． Genetic interaction of flavivirus nonstructural proteins NS1 and NS4A as a determinant of replicase function[J]． J Virol， 1999， 73: 4611-4621．
[9] Lindenbach B D，Rice C M． Trans-complementation of yellow fever virus NS1 reveals a role in early RNA replication[J]． J Virol， 1997， 71: 9608-9617．
[10] Pacca C C，Severino A A，Mondini A， et al． RNA interference inhibits yellow fever virus replication in vitro and vivo[J]． Virus genes， 2009， 38( 2) 224-231．
[11] Alcon-LePoder S， Sivard P，Drouet M T， et al． Secretion of flaviviral non-structural protein NS1: from diagnosis to pathogenesis[J]． Novartis Found Symp， 2006， 277:233-247．
[12] Avirutnan P，Punyadee N，Noisakran S， et al． Vascular leakage in severe dengue virus infections: a potential role for the nonstructural viral protein NS1 and complement[J]． J Infect Dis， 2006， 193( 8) : 1078-1088．
[13] Schlesinger J J． Flavivirus nonstructural protein NS1: complementary surprises[J]． Proc Natl Acad Sci USA， 2006， 103( 50) : 18879-18880．
[14] Tafuku S，Miyata T，Tadano M， et al． Japanese encephalitis virus structural and nonstructural proteins expressed in Escherichia coli induce protective immunity in mice[J]． Microbes Infect， 2012， 14( 2) : 169-176．
[15] Mackenzie J M， Jones M K，Young P R． Immunolocalization of the dengue virus nonstructural glycoprotein NS1 suggests a role in viral RNA replication[J]． Virology， 1996， 220: 232-240．
[16] Konishi E，Kitai Y． Detection by ELISA of antibodies to Japanese encephalitis virus nonstructural 1 protein induced in subclinically infected humans[J]． Vaccine， 2009， 27( 50) : 7053-7058．

选择文件类型/文献管理软件名称

选择包含的内容

鹅坦布苏病毒非结构蛋白NS1的原核表达及纯化

Prokaryotic Expression and Purification of Nonstructural Protein NS1 of Goose Tembusu Virus

PDF

可视化

被引次数

摘要/Abstract

引用本文

使用本文

参考文献

相关文章 15

编辑推荐

Metrics

本文评价

[1]	肖士奎, 李芳, 张文婷, 吕淑芳, 史国安, 吴疆, 范丙友. *芍药ACS基因的克隆及其蛋白质原核表达*[J]. 华北农学报, 2022, 37(5): 36-44.
[2]	王亚男, 梁岩岩, 严文培, 张银萍, 李强, 吴秀菊. *北细辛AhOMT1基因的克隆及原核表达分析*[J]. 华北农学报, 2022, 37(4): 62-70.
[3]	连凯琪, 纪爽, 周玲玲, 时志琪, 王飞, 张元臣. 黏虫clip型丝氨酸蛋白酶基因的克隆及原核表达[J]. 华北农学报, 2022, 37(1): 195-201.
[4]	范会芬, 孙天杰, 苏伟华, 肖付明, 张洁, 王冬梅. 大豆GmWRKY50的抗体制备及其蛋白水平表达分析[J]. 华北农学报, 2021, 36(6): 28-34.
[5]	徐欢, 段盛文, 冯湘沅, 郑科, 杨琦, 汪启明, 成莉凤, 彭源德. 苎麻脱胶果胶裂解酶基因的高效表达及序列分析[J]. 华北农学报, 2021, 36(5): 18-23.
[6]	雷其冬, 孙旭东, 徐慧妮. *拟南芥AtTCP4基因克隆及原核表达*[J]. 华北农学报, 2021, 36(5): 24-28.
[7]	姜楠, 郑倩倩, 李倩文, 涂健, 宋祥军, 邵颖, 刘红梅, 祁克宗. *APEC毒力基因ygeG的原核表达载体构建、表达纯化及鉴定*[J]. 华北农学报, 2021, 36(5): 184-190.
[8]	于天飞, 谢鹏宇, 孙婉姝, 李静, 尹海畅, 黎明, 于志丹. 抗鹅细小病毒NS1蛋白单克隆抗体可变区的原核表达[J]. 华北农学报, 2021, 36(5): 211-215.
[9]	王海波, 李芙蓉, 杨金翠, 高永, 郭俊云. *小桐子磷酸葡萄糖变位酶cPGM与pPGM基因的克隆及原核表达分析*[J]. 华北农学报, 2021, 36(4): 23-30.
[10]	李默晓, 卞哲, 周启慧, 刘玉卫, 巩校东, 谷守芹, 韩建民. *玉米大斑病菌StRTG2基因结构、原核表达及表达模式分析*[J]. 华北农学报, 2021, 36(4): 191-196.
[11]	刘庆, 孙廷钊, 盖树鹏, 张玉喜, 刘春英. 牡丹PsZFP1转录因子的特性及表达分析[J]. 华北农学报, 2021, 36(3): 67-73.
[12]	李佳皓, 谢敏秋, 万传银, 左瑞洁, 鲁黎明, 李立芹. *马铃薯转录因子StTCP13基因的原核表达及盐胁迫功能研究*[J]. 华北农学报, 2021, 36(2): 33-39.
[13]	胡月清, 王若仲, 黄志刚, 萧浪涛. *马铃薯转录因子基因StWRKY57的克隆及其蛋白原核表达*[J]. 华北农学报, 2021, 36(1): 10-17.
[14]	刘东, 兰艳平, 张丽, 赵岩, 渠云芳, 黄晋玲. *棉花GhPDP基因原核表达条件的优化*[J]. 华北农学报, 2020, 35(5): 55-61.
[15]	栾庆东, 孙举, 刘均华, 张本清, 尹燕博, 王建琳. 我国主要流行的4种血清型禽腺病毒-Ⅰ群Fiber蛋白的交叉中和研究[J]. 华北农学报, 2020, 35(5): 214-219.

模态框（Modal）标题

选择文件类型/文献管理软件名称

选择包含的内容

鹅坦布苏病毒非结构蛋白NS1的原核表达及纯化

Prokaryotic Expression and Purification of Nonstructural Protein NS1 of Goose Tembusu Virus

PDF

可视化

被引次数

摘要/Abstract

引用本文

使用本文

参考文献

相关文章 15

编辑推荐

Metrics

本文评价