PPRV Nigeria75/1 H蛋白原核表达及抗原表位预测

doi:10.7668/hbnxb.2018.05.016

华北农学报 ›› 2018, Vol. 33 ›› Issue (5): 111-116. doi: 10.7668/hbnxb.2018.05.016

PPRV Nigeria75/1 H蛋白原核表达及抗原表位预测

李林杰^1,2,3, 常秋燕^1,2,3, 马鹏^1,2,3, 王悦萦^1,2,3, 马晓霞^1,2,3, 柏家林^1,2,3

1. 西北民族大学甘肃省动物细胞工程技术研究中心, 甘肃兰州 730030;
2. 西北民族大学生物医学研究中心, 甘肃兰州 730030;
3. 西北民族大学生命科学与工程学院, 甘肃兰州 730030

收稿日期:2018-07-14 出版日期:2018-10-28
通讯作者: 柏家林(1966-),男,甘肃天水人,教授,博士,主要从事动物细胞基因工程、基因工程疫苗研究。
作者简介:李林杰(1992-),女,山西大同人,在读硕士,主要从事动物分子病毒学与分子免疫研究。
基金资助:
国家自然科学基金项目（31860696）；动物医学生物工程创新团队发展计划（IRT_17R88）；甘肃省科技计划资助（17YF1WA166）

Prokaryotic Expression of PPRV Nigeria75/1 H Protein and Prediction of Antigen Epitope

LI Linjie^1,2,3, CHANG Qiuyan^1,2,3, MA Peng^1,2,3, WANG Yueying^1,2,3, MA Xiaoxia^1,2,3, BAI Jialin^1,2,3

1. Gansu Engineering and Technology Research Center for Animal Cell, Northwest Minzu University, Lanzhou 730030, China;
2. Pennington Biomedical Research Center, Northwest Minzu University, Lanzhou 730030, China;
3. Life Science and Engineering College, Northwest Minzu University, Lanzhou 730030, China

Received:2018-07-14 Published:2018-10-28

摘要/Abstract

摘要： 克隆并原核表达小反刍兽疫病毒弱毒疫苗株血凝素蛋白（H）全长基因，并通过生物信息学的方法预测其B抗原表位。根据NCBI中PPRV基因组序列中H基因序列（GenBank X74443）设计一对引物，采用RT-PCR方法扩增其全长；将扩增产物克隆至原核表达载体pET-32a后，转化至大肠杆菌E.coli Rosetta，经IPTG 37℃诱导表达目的蛋白；表达的目的蛋白经带His标签的镍离子蛋白纯化柱纯化后，进行Western Blot鉴定。利用DNAStar软件采用生物信息学的方法预测其H蛋白潜在的抗原表位。结果显示，质粒pET-32a-H经双酶切鉴定及测序后可证明构建正确；表达的目的蛋白相对分子质量约67 ku，能被抗His标签抗体识别，主要以包涵体形式存在，有少量可溶性表达。通过生物信息学软件DNAStar成功找到H蛋白的潜在抗原表位5-8，14-16，73-75，83-90，125-131，142-147，170-177，236-245，281-285，312-317，360-363，370-379，388-391，445-449，487-489，503-505，520-522，532-535，544-551，592-595。试验成功构建阳性质粒pET-32a-H，表达目的蛋白，并成功预测出H蛋白潜在的抗原表位。为早日消除PPRV研制新型亚单位疫苗提供参考。

关键词: 小反刍兽疫病毒, H蛋白, 原核表达, B细胞抗原表位

Abstract: To clone the gene encoding hemagglutinin(H)protein of Nigeria 75/1 strain of attenuated Peste des petits ruminants virus(PPRV),express in prokaryotic cells and prepare its polyclonal antibody by bioinformatics. According to the encoding sequence of PPRV H gene(GenBank X74443),a pair of primers were designed,with which the overall length were amplified by RT-PCR and inserted into vector pET-32a. The constructed recombinant plasmid was transformed to E. coli Rosetta for expression under the induction of 1 mmol/L IPTG at 37℃. The expressed products were purified by affinity chromatography using the nickel ion protein purification volume with His tag,and identified by Western Blot. Preparing its polyclonal antibody by bioinformatics.Restriction analysis proved that recombinant plasmid pET-32a-H was constructed correctly. The expressed PPRV H protein,with a relative molecular mass of about 67 ku. The prepared polyclonal antibody recognized the whole viral antigen of PPRV and recombinant PPRV H protein expressed in baculovirus. Recombinant plasmid pET-32a-H was constructed successfully,and PPRV H protein was successfully expressed. Useing bioinformatics could find polyclonal antibody 5-8,14-16,73-75,83-90,125-131,142-147,170-177,236-245,281-285,312-317,360-363,370-379, 388-391,445-449,487-489,503-505,520-522,532-535,544-551,592-595. The positive plasmid pET-32a-H was successfully constructed,and the target protein was expressed. The potential epitope of H protein was successfully predicted. It is important for elimination of PPRV earlyer and preparation of novel subunit vaccines.

Key words: Peste des petits ruminants virus, H protein, Prokaryotic expression, B cell epiyope

中图分类号:

李林杰, 常秋燕, 马鹏, 王悦萦, 马晓霞, 柏家林. PPRV Nigeria75/1 H蛋白原核表达及抗原表位预测[J]. 华北农学报, 2018, 33(5): 111-116. doi: 10.7668/hbnxb.2018.05.016.

LI Linjie, CHANG Qiuyan, MA Peng, WANG Yueying, MA Xiaoxia, BAI Jialin. Prokaryotic Expression of PPRV Nigeria75/1 H Protein and Prediction of Antigen Epitope[J]. ACTA AGRICULTURAE BOREALI-SINICA, 2018, 33(5): 111-116. doi: 10.7668/hbnxb.2018.05.016.

http://www.hbnxb.net/CN/Y2018/V33/I5/111

参考文献

[1] Ismail I M,House J. Evidence of identification of peste des petits ruminants from goats in Egypt[J]. Archiv Fur Experimentelle Velerinarmedizin,1990,44(3):471-474.
[2] 李林杰,谢军,徐文凯,等. 小反刍兽疫病毒的研究进展[J]. 黑龙江畜牧兽医,2018(1):66-70.
[3] 邢泽黎,朱利塞,郭昌明. 吉林省某羊群暴发小反刍兽疫[J]. 中国兽医科学,2014,5(15):1005-4545.
[4] Diallo A,Minet C,Goff C L,et al. The threat of peste des petits ruminants:progress in vaccine development for disease control[J]. Vaccine,2007,25(30):5591-5597.
[5] 王秋霞,杨香芳,窦永喜. 小反刍兽疫病毒样颗粒装配的研究[J]. 中国兽医科学,2014,44(12):1297-1303.
[6] Sinnathamby G,Gj R,Rajasekhar M,et al. Immune reponses in goats to recombinant hemagglutinin-neuraminidase glycoprotein of Peste des petits ruminants virus identification of a T cell determinant[J]. Vaccine,2001,19(32):4816-4823.
[7] 信爱国,杨仕标,向文彬. 小反刍兽疫研究进展[J].中国预防兽医报,2003,25(2):152-155.
[8] Karplus P A,Schulz G E. Prediction of chain flexibility in proteins[J]. Naturwissenschaften,1985,72(4):212-213.
[9] 李海侠,毛旭虎. 蛋白质抗原表位研究进展[J]. 微生物学免疫学进展,2007,35(1):54-58.
[10] Wang Y,Liu G Q,Shi L J,et al. Immune responses in mice vaccinated with a suicidal DNA vaccine expressing the hemagglutinin glycoprotein from the Peste des petits ruminants virus[J]. Journal of Virological Methods,2013,193(2):525-530.
[11] 闫飞虎,王化磊,邱泊宁,等. 小反刍兽疫病毒H蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备[J]. 中国生物制品学杂志,2016,29(6):576-581.
[12] Zhang X,Zhao W,Li C,et al. Differential expression of miR-34c and its predicted target genes in testicular tissue at different development stages of swine[J]. Asian-Australas J Anim Sci,2015,28(11):1532-1536.
[13] Tanaka T,Kanatsu-Sshnohara M,Shinohara T. The CDKN1B-RB1-E2F1 pathway protects mouse spermatogonial stem cells from genomic damage[J]. J Reproud Dev,2015,61(4):305-316.
[14] Kwom J T,Jin S,Choi H,et al. Identification and characterization of germ cell genes expressed in the F9 testicular teratoma stem cell line[J]. PLoS One,2014,9(8):e103837.
[15] Kumar N,Maherchandani S,Kashyap S K,et al. Peste des petits ruminants virus infection of small ruminants:a comprehensive review[J]. Viruses,2014,6(6):2287-2327.
[16] Hopp T P,Woods K R. Prediction of protein antigenic determinants from amino acid sequences[J]. Proc Natl Acad Sci USA,1981,78(6):3824-3828.
[17] 王艳华,张德林,殷宏,等. 抗原表位预测方法的研究进展[J]. 中国兽医科学,2009,39(10):938-940.
[18] 高位相. 小反当兽疫病毒H蛋白的表达及其B细胞线性表位筛选[D]. 合肥:安徽农业大学,2015.
[19] 郑伟. 蛋白质结构研究及B细胞表位预测[D]. 天津:南开大学,2014.
[20] 周建华,丛国正,高闪电,等. FMDV OA/58病毒株VP1蛋白结构构建与B细胞抗原表位的预测[J].华北农学报,2007,22(4):176-179
[21] ApostolopoulosV,Yu M,Corper A L,et al. Crystal structure of a noncanonical low affinity peptide complexed with MHC class Ⅰ:a new approach for vaccine design[J]. Journal of Molecular Biology,2002,318(5):1293-1305.

选择文件类型/文献管理软件名称

选择包含的内容

PPRV Nigeria75/1 H蛋白原核表达及抗原表位预测

Prokaryotic Expression of PPRV Nigeria75/1 H Protein and Prediction of Antigen Epitope

PDF

可视化

被引次数

摘要/Abstract

引用本文

使用本文

参考文献

相关文章 15

编辑推荐

Metrics

本文评价

[1]	肖士奎, 李芳, 张文婷, 吕淑芳, 史国安, 吴疆, 范丙友. *芍药ACS基因的克隆及其蛋白质原核表达*[J]. 华北农学报, 2022, 37(5): 36-44.
[2]	王亚男, 梁岩岩, 严文培, 张银萍, 李强, 吴秀菊. *北细辛AhOMT1基因的克隆及原核表达分析*[J]. 华北农学报, 2022, 37(4): 62-70.
[3]	连凯琪, 纪爽, 周玲玲, 时志琪, 王飞, 张元臣. 黏虫clip型丝氨酸蛋白酶基因的克隆及原核表达[J]. 华北农学报, 2022, 37(1): 195-201.
[4]	范会芬, 孙天杰, 苏伟华, 肖付明, 张洁, 王冬梅. 大豆GmWRKY50的抗体制备及其蛋白水平表达分析[J]. 华北农学报, 2021, 36(6): 28-34.
[5]	姜楠, 郑倩倩, 李倩文, 涂健, 宋祥军, 邵颖, 刘红梅, 祁克宗. *APEC毒力基因ygeG的原核表达载体构建、表达纯化及鉴定*[J]. 华北农学报, 2021, 36(5): 184-190.
[6]	于天飞, 谢鹏宇, 孙婉姝, 李静, 尹海畅, 黎明, 于志丹. 抗鹅细小病毒NS1蛋白单克隆抗体可变区的原核表达[J]. 华北农学报, 2021, 36(5): 211-215.
[7]	徐欢, 段盛文, 冯湘沅, 郑科, 杨琦, 汪启明, 成莉凤, 彭源德. 苎麻脱胶果胶裂解酶基因的高效表达及序列分析[J]. 华北农学报, 2021, 36(5): 18-23.
[8]	雷其冬, 孙旭东, 徐慧妮. *拟南芥AtTCP4基因克隆及原核表达*[J]. 华北农学报, 2021, 36(5): 24-28.
[9]	李默晓, 卞哲, 周启慧, 刘玉卫, 巩校东, 谷守芹, 韩建民. *玉米大斑病菌StRTG2基因结构、原核表达及表达模式分析*[J]. 华北农学报, 2021, 36(4): 191-196.
[10]	王海波, 李芙蓉, 杨金翠, 高永, 郭俊云. *小桐子磷酸葡萄糖变位酶cPGM与pPGM基因的克隆及原核表达分析*[J]. 华北农学报, 2021, 36(4): 23-30.
[11]	刘庆, 孙廷钊, 盖树鹏, 张玉喜, 刘春英. 牡丹PsZFP1转录因子的特性及表达分析[J]. 华北农学报, 2021, 36(3): 67-73.
[12]	李佳皓, 谢敏秋, 万传银, 左瑞洁, 鲁黎明, 李立芹. *马铃薯转录因子StTCP13基因的原核表达及盐胁迫功能研究*[J]. 华北农学报, 2021, 36(2): 33-39.
[13]	胡月清, 王若仲, 黄志刚, 萧浪涛. *马铃薯转录因子基因StWRKY57的克隆及其蛋白原核表达*[J]. 华北农学报, 2021, 36(1): 10-17.
[14]	刘东, 兰艳平, 张丽, 赵岩, 渠云芳, 黄晋玲. *棉花GhPDP基因原核表达条件的优化*[J]. 华北农学报, 2020, 35(5): 55-61.
[15]	栾庆东, 孙举, 刘均华, 张本清, 尹燕博, 王建琳. 我国主要流行的4种血清型禽腺病毒-Ⅰ群Fiber蛋白的交叉中和研究[J]. 华北农学报, 2020, 35(5): 214-219.

模态框（Modal）标题

选择文件类型/文献管理软件名称

选择包含的内容

PPRV Nigeria75/1 H蛋白原核表达及抗原表位预测

Prokaryotic Expression of PPRV Nigeria75/1 H Protein and Prediction of Antigen Epitope

PDF

可视化

被引次数

摘要/Abstract

引用本文

使用本文

参考文献

相关文章 15

编辑推荐

Metrics

本文评价