为了解浙江省规模化猪场患病猪副猪嗜血杆菌的耐药性,采用K-B琼脂法对73株HPS浙江株进行了18种临床药物的敏感性试验,同时应用PCR技术对11个相关耐药基因进行扩增、测序和比对分析。药敏试验结果显示:对磺胺类耐药的分离株比例高达86.30%,对四环素类、氨基糖苷类、喹诺酮类、β-内酰胺类和氯霉素类耐药的比例分别为65.75%,60.27%,50.68%,50.68%,46.58%,对大环内酯类耐药仅为28.77%。PCR分析显示:97.26%的菌株中检测到耐药基因,多重耐药的占84.93%。其中喹诺酮类耐药基因Aac(6’)-1b的检出率为76.71%,氨基糖苷类耐药基因AadA1的检出率为65.75%,磺胺类耐药基因Sul1和Sul2的检出率为45.2%和10.96%,氯霉素类耐药基因Flor、CmLA、Cat1的检出率为15.07%,8.22%,58.9%,四环素类耐药基因TetA和TetB的检出率为4.11%和49.32%,β-内酰胺类耐药基因Tem-11的检出率为35.62%,大环内酯类耐药基因ErmB的检出率为1.37%。耐药基因型和表型符合率为:磺胺类62.07%,β-内酰胺类74.29%,氯霉素类81.48%,四环素类75.00%,大环内酯类0,喹诺酮类75.68%,氨基糖苷类72.09%。因此,HPS在浙江规模化猪场对临床药物已产生了耐药性,通过耐药基因检测结果确定耐药菌株具有一定的参考价值。
This study was conducted to investigate the resistance to common antibiotics and genes of Haemophi- lus parasuis isolated from the scaled pig farms in Zhejiang province．A total of 73 Zhejiang H．parasuis isolates were tested for their resistance to 18 antibiotics by K- B method．PCR was used to detect related genes．The amplified products were sequenced and aligned．The results showed that 86．30% isolates were resistant to sulfonamides， 65.75%，60．27%，50．68%，50．68% and 46．58% isolates were resistant to tetracyclines，aminoglycosides，quino- lones，- lactam antibiotics，chloramphenicols，respectively，while only 28．77% isolates were resistant to macrolides． Resistance genes were detected in 97．26% isolates，and multiple resistance genes were found in 84．93% isolates． The rates of resistance genes Aac(6')－ 1b，AadA1，Sul1，Sul2，Flor，CmLA，Cat1，TetA，TetB，Tem- 11 and ErmB were 76．71%，65．75%，45．2%，10．96%，15．07%，8．22%，58．9%，4．11%，49．32%，35．62% and 1．37%，respec- tively．The coincidence of phenotype and genotype for the isolates to resist sulfonamides，- lactam antibiotics，chlor- amphenicols，tetracyclines，macrolides，quinolones and aminoglycoside antibiotics were 62．07%，74．29%， 81. 48%，75．00%，0，75．68% and 72．09%，respectively．Therefore，H．parasuis has developed resistance to clini- cally commonly used antibiotics and the results from analysis of drug- resistant gene could be used as reference to determine resistance bacteria．
[1] Oliveira S，Pijoan C． Haemophilus parasuis: new trends on diagnosis epidemiology and control [J]. Vet Microbiol，2004，99(1): 1-12．
[2] 中国兽医学会． 2010 年执业兽医资格考试应试指南 (上) [M]. 北京: 中国农业出版社，2010: 644-646．
[3] 周学利 副猪嗜血杆菌分离株的血清分型及其耐药性 研究[D]. 武汉: 华中农业大学，2009．
[4] 宋德平，肖根辉，王萍，等． 副猪嗜血杆菌江西分离 株药物敏感性及四环素耐药基因 tet(B) 分析[J]. 中 国预防兽医学报，2011，33(10): 785-789．
[5] 刘开成，郑增忍，单虎，等． 不同地区猪源大肠埃希菌磺胺类药物耐药性研究[J]. 动物医学进展，2011，32(4): 76-79．
[6] 齐亚银，张莉，王静梅，等． 动物源粪肠球菌对 7 种 抗生素耐药表型及耐药基因检测[J]. 中国兽医学报，2010，7(30): 962-965．
[7] 杨鑫，王红宁，张安云，等． 大肠杆菌氯霉素类耐药 基因三重 PCR 检测试剂盒的研究与应用[J]. 中国兽 医杂志，2009，2(45): 11-13．
[8] 廖成水，程相朝，张春杰，等． 鸡源致病性沙门氏菌新 近分离株的耐药性与耐药基因[J]. 中国兽医科学，2011，41(07): 751-755．
[9] 张纯萍，宁宜宝，宋 立． 健康鸡猪体内大肠杆菌对四 环素的耐药性及耐药基因分布[J]. 中国农业科学，2010，43(12): 2578-2583．
[10] 徐丽慧，王贤军，王敏敏，等． 肺炎链球菌大环内酯药 物耐药性及耐药基因 erm erf 的检测[J]. 中国学术 期刊电子出版社，1994-2011: 313-317．
[11] 张烽，潘宇红． 1 株携带多种喹诺酮类药物耐药机 制肺炎克雷伯菌的发现[J]. 中华医院感染学杂志，2010，20(17): 2553-2555．
[12] 马孟根，王红宁，余勇，等． 大肠埃希氏菌和沙门菌 氨基糖苷耐药基因 PCR 检测方法的建立[J]. 中国兽 医科技，2005，35(4): 277-283．
[13] De la Fuente A J，Tucker A W，Nacas J． Antimicrobial susceptibility patterns of Haemophilus parasuis from pigs in the United Kingdom and spain[J]. Veterinary Micro-biology，2007，120: 184-191．
[14] 周万蓉，王红宁，张安云，等． 猪和野生动物源大肠杆 菌及沙门菌中磺胺类药物耐药基因的检测[J]. 中国 兽医科学，2007，37(4): 287-290
[15] Jacoby G A，Archer G L． New mechanism of bacterial re-sistance to antimicrobial agents[J]. New England jour-nal medicine，2004，324: 601-605．
[16] Bradford P A． Extended-spectrum-lactamases in the 21st century: characterization，Epidemiology，and detec-tion of this important resistance threat[J]. Clinical Mi-crobiol Rev，2001，14: 933-951．
[17] 叶满玉，王红宁，田国宝，等． 猪鸡致病性大肠杆菌 沙 门氏菌对－内酰胺类药耐药表型和基因检测[J]. 中 国兽医杂志，2010，46(3): 15-18．
[18] 杜向党，阎若潜，沈建忠． 氯霉素类药物耐药机制的 研究进展[J]. 动物医学进展，2004，25(2): 27-29．
[19] Chopra I，Roberts M． Tetracycline antibiotics: mode of action，applications，molecular biology，and epidemiology of bacterial resistance[J]. Microbiol Mol Biol Rev，2001，65(2): 232．
[20] Lee C，Lang lois B E，Daw son K A． Detection of tetracy-cline resistance determinants in pig isolates from tree herds with different histories of antimicrobial agent expo-sure[J]. Appl Envir Microbiol，1993，59(5): 1467．
[21] 汤景元，王红宁，张鹏举，等． 95 个猪场大肠杆菌耐药 表型及氨基糖苷类药物耐药基因型调查[J]. 畜牧兽 医学报，2008，39(4): 472-477．
[22] 黄彬，陈茶，汤晓丽，等． 肺炎克雷伯菌对喹诺酮 类及氨基糖苷类耐药基因检测及耐药机制分析[J]. 中华医院感染学杂志，2011，21(1): 5-7．
