香菇纤维素酶基<em>cel6B</em>的克隆及表达

doi:10.7668/hbnxb.2011.03.009

华北农学报 ›› 2011, Vol. 26 ›› Issue (3): 42-46. doi: 10.7668/hbnxb.2011.03.009

香菇纤维素酶基cel6B的克隆及表达

杨婷, 裴雁曦, 王景雪

山西大学生命科学学院, 山西太原 030006

收稿日期:2011-01-25 出版日期:2011-06-28
通讯作者: 王景雪(1961- )，女，山西新绛人，教授，博士，硕士生导师，主要从事植物基因工程研究。
作者简介:杨婷(1982- ),女,河北唐山人,助理研究员,在读硕士,主要从事细胞生物学研究.
基金资助:
山西省攻关计划(2007031002-14)

Cloning of Celluase Gene cel6B from Lentinula edodes and Its Expression in Escherichia coil

YANG Ting, PEI Yan-xi, WANG Jing-xue

College of Life Science,Shanxi University,Taiyuan 030006,China

Received:2011-01-25 Published:2011-06-28

摘要/Abstract

摘要： 以液体PDA中培养的香菇菌丝体为材料,提取香菇总RNA,通过RT-PCR方法,克隆得到纤维素酶基因cel6B,并成功构建了原核表达载体pET28a-cel6B;将该载体转人大肠杆菌BL21(DE3)中,构建工程菌,用IPTG诱导蛋白质的表达.SDS-PAGE电泳结果表明:在IPTG诱导下,cel6B基因编码出46.4 kDa的蛋白质CEL6B.将工程菌在CMC-Na(羧甲基纤维素钠)为唯一碳源的刚果红液体培养基中培养7 d后,培养基红色变浅,初步证明纤维素酶CEL6B具有分解纤维素的能力.

关键词: 香菇, 纤维素酶, cel6B基因, 刚果红, RT-PCR

Abstract: Total RNA was extracted from L.edodes cultured in liquid PDA medium.The predicted gene cel6B was cloned via RT-PCR and sequenced.The result of sequence analysis showed the gene belongs to Glycosyl hydrolases family 6.Prokaryotic expression vector pET28a-cel6B was constructed.The 46.4 kDa protein CEL6B was expressed based on the result of SDS-PAGE.The bacteria containing pET28a-cel6B was cultured in CMC-Na-congo red medium which has CMC-Na as the solo carbon source to test the cellulase activity.The result of primary bioactivity analysis showed that CEL6B has cellulase function.

Key words: Lentinula edodes, Cellulase, cel6B gene, Congo red, RT-PCR

中图分类号:

S67.3+9
Q78

杨婷, 裴雁曦, 王景雪. 香菇纤维素酶基cel6B的克隆及表达[J]. 华北农学报, 2011, 26(3): 42-46. doi: 10.7668/hbnxb.2011.03.009.

YANG Ting, PEI Yan-xi, WANG Jing-xue. Cloning of Celluase Gene cel6B from Lentinula edodes and Its Expression in Escherichia coil[J]. ACTA AGRICULTURAE BOREALI-SINICA, 2011, 26(3): 42-46. doi: 10.7668/hbnxb.2011.03.009.

http://www.hbnxb.net/CN/Y2011/V26/I3/42

参考文献

[1] 刘永生,冯家勋,段承杰,等.能降解天然纤维素的地衣芽孢杆菌GXN151的分离鉴定及其一个纤维素酶基因(cel5A)的克隆和测序分析[J].广西农业生物科学,2003,22(2):132-138.

[2] 武秀琴.纤维素酶及其应用[J].微生物学杂志,2009,29(2):89-92.

[3] Rajeev K S,Reeta R S,Gincy M M,et al.Cellulase production using biomass feed stock and its application in lignocellulose saccharification for bio-ethanol production[J].Renewable Energy,2009 (34):421-424.

[4] 白洪志,杨谦,张鲁进.纤维素降解菌简青霉H-11的筛选及酶学特性的研究[J].华北农学报,2007,22(3):160-162.

[5] Zhou Jin,Wang Y H,Chu Ju,et al.Optimization of cellulase mixture for efficient hydrolysis of steam-exploded corn stover by statistically designed experiments[J].Bioresource Technology,2009,100 (2):819-825.

[6] 刘起丽,张建新,徐瑞富,等.纤维素刚果红培养基选产纤维素酶菌株的影响因素研究[J].西北农业学报,2007,16(5):279-281.

[7] 吕慧卿,李日强,董良利,等.一株秸秆分解菌的分离及酶活力测定[J].山西农业科学,2004,32(2):53-56.

[8] Chen Y,Stipanovic Arthur J,William T Winter,et al.Effect of digestion by pure cellulases on crystallinity and average chain length for bacterial and microcrystalline celluloses[J].Cellulose,2007,14 (4):283-293.

[9] Thu V,David B,Wilson.The absence of and identifiable single catalytic base residue in thermobifida fusca exocellulase CeI6B[J].The FEBS Journal,2009,276:4261-4269.

[10] 张超,李艳宾,张磊,等.纤维素-刚果红培养基鉴定产纤维素酶真菌的机理研究[J].纤维素科学与技术,2007,15(2):39-44.

[11] Charles C Lee,Dominic WS Wong,George H Robertson.Cloning and characterization of two cellulase genes from Lentinula edodes[J].Microbiology,2001,205:355-360.

[12] 沈业寿,王光存,陈斌.超薄层琼脂板扩散法快速检测纤维素酶[J].中国食用菌,1994,13(5):33-35.

[13] 顾方媛,陈朝银,石家骥,等.纤维素酶的研究进展与发展趋势[J].微生物学杂志,2008,28(1):83-87.

[1]	冯丽婷, 张剑峰, 迟胜起. 甘薯4种RNA病毒多重RT-PCR检测方法的建立[J]. 华北农学报, 2022, 37(4): 206-211.
[2]	梁鹏, 张稳, 冯登侦, 强浩, 荣轩, 孟科. 基于转录组学筛选绵羊肉质性状相关候选基因[J]. 华北农学报, 2022, 37(4): 220-231.
[3]	唐忠丽, 逯晓楠, 赵蕊, 刘庆华, 李梅兰, 雷逢进, 许小勇. *黄皮西葫芦类胡萝卜素合成酶基因的鉴定及PSY1和LCYE2克隆分析*[J]. 华北农学报, 2022, 37(3): 60-67.
[4]	李班, 吕莹, 杨明煊, 宋婷, 于放, 刘志文. 盐碱胁迫对甘蓝型油菜生理及分子机制的影响[J]. 华北农学报, 2022, 37(3): 86-93.
[5]	张晋玉, 徐新娟, 晁毛妮, 张晓红, 吴向远, 高际涛, 黄中文. *大豆GmZAT12基因的克隆和表达分析*[J]. 华北农学报, 2022, 37(3): 1-7.
[6]	柴阿丽, 陈利达, 许帅, 帕提古丽·艾斯木托拉, 王利丽, 石延霞, 谢学文, 李磊, 李宝聚. 新疆喀什辣椒轻斑驳病毒和黄瓜花叶病毒复合侵染的分子鉴定[J]. 华北农学报, 2020, 35(S1): 332-337.
[7]	荣恒, 张梦瑶, 贺建宁, 柳楠. *利用同源重组构建BMP6、BMPR1B真核表达载体及共转染成纤维细胞表达的研究*[J]. 华北农学报, 2020, 35(6): 195-201.
[8]	韩信嵘, 吴慧光, 吴江鸿, 王国富, 高树新. 基于转录组学的安格斯牛和中国西门塔尔牛脂肪沉积相关差异表达基因研究[J]. 华北农学报, 2020, 35(6): 208-216.
[9]	齐香玉, 陈双双, 冯景, 王华娣, 邓衍明. 茉莉花实时荧光定量PCR内参基因的筛选与验证[J]. 华北农学报, 2020, 35(6): 22-30.
[10]	贺丹, 张佼蕊, 何松林, 刘红利, 王政, 刘艺平. *芍药属远缘杂交不亲和PlABCF3基因克隆及表达分析*[J]. 华北农学报, 2020, 35(6): 81-89.
[11]	李晶, 张梦瑶, 刘开东, 柳楠, 贺建宁. *利用同源重组技术构建Hoxa5、BMP6真核表达载体及共转染成纤维细胞表达*[J]. 华北农学报, 2020, 35(4): 187-194.
[12]	赵艳, 刘阔成, 王珏, 马晓宇, 孙天国. *大豆种子成熟蛋白PM40基因表达方式分析及其启动子预测*[J]. 华北农学报, 2020, 35(3): 7-11.
[13]	张梦瑶, 杨峰, 刘开东, 刘积凤, 柳楠, 贺建宁, 薛明. *敖汉细毛羊BMP4基因质粒的构建及在成纤维细胞中表达量的研究*[J]. 华北农学报, 2019, 34(6): 227-234.
[14]	张梦瑶, 杨峰, 刘积凤, 刘开东, 贺建宁, 柳楠. *敖汉细毛羊Hoxa5、BMPR1B基因互作研究*[J]. 华北农学报, 2019, 34(2): 229-238.
[15]	张梦瑶, 杨峰, 刘开东, 刘积凤, 贺建宁, 柳楠. *利用同源重组技术构建DKK1、BMP4真核表达载体及共转染成纤维细胞表达的研究*[J]. 华北农学报, 2018, 33(5): 117-124.

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