番茄不孕病毒(TAV)、菊花B病毒(CVB)、菊花褪绿斑驳类病毒(CChMVd)是侵染菊花的3种主要病毒,严重影响菊花品质。利用Blast及分子生物学软件DNAStaR对TAV、CVB、CChMVd基因序列同源性进行分析比较,选用TAV的277 bp(1 810～2 086),CVB的281 bp(496～776),CChMVd的217 bp(109～325)的部分基因片段,应用重叠延伸PCR技术将其拼接成融合基因CBT,构建了以CaMV 35S启动子驱动的含有"正向CBT片段-内含子-反向CBT片段"的RNAi的植物表达载体,为培育抗3种病毒的菊花优异种质资源奠定基础。
Tomato aspeRmy viRus，ChRysanthemum B ViRus and ChRysanthemums ChloRotic Mottle ViRoid aRe the main viRus which endangeR ChRysanthemum． These viRuses cause dRastic Reduction in yield as well as in maRket quality of blooms and ultimately affect the floRicultuRe industRy of the countRy． PeRfoRming homology analysis on TAV， CVB and CChMVd with softwaRe Blast and DNAStaR followed by using 277 bp fRagments fRom TAV( 1 810 - 2 086) ， 281 bp fRagments fRom CVB( 496 - 776) and 217 bp fRagments fRom CChMVd( 109 - 325) to make the fusion gene CBT with oveRlap PCR． Then the pRomoteR CaMV 35S dRiven，containing foRwaRd CBT fusion fRagments-Revelse pdk intRon-ReveRse CBT fusion fRagments'，plant RNAi expRession vectoR weRe constRucted，which lay the foundation foR bReeding tRansgene plant which Resistant viRus．
[1] 保坂康弘，川雅茂富，松井千秋． 植物病毒图鉴[M]． 北京: 农业出版社， 1980: 43 - 317．
[2] 孔宝华，李德葆． 侵染菊花的番茄不孕病毒[J]． 浙江 农业大学学报， 1990， 16( 1) : 55 - 60．
[3] 舒香芳，朱水芳，胡伟贞，等． 侵染菊花和风信子的番 茄不孕病毒的鉴定[J]． 病毒学杂志，1990( 2) : 186 - 192．
[4] 蔡健和，朱西儒． 几种菊花的病毒病病原鉴定[J]． 广 西农业科学， 1994( 6) : 282 - 283．
[5] 颜琛娜，王永勤，杨清，等． 两重RT-PCR 同步检测菊 花B 病毒和番茄不孕病毒[J]． 植物保护，2009，35 ( 3) : 89 - 90．
[6] 吴红芝，孔宝华，陈海如，等． 昆明地区菊花病毒病的 调查与鉴定[J]． 云南农业大学学报，2002，17( 1) : 24 - 27．
[7] 杨鹏辉，王仁睿，刘军，等． 花脱毒无害化技术研究 进展[J]． 陕西农业科学， 2011( 1) : 89 - 92， 108．
[8] 宋瑞林，吴如健． 菊花矮化病毒福建省菊花病毒病的 初步调查与检测[J]． 福建农业科技， 1997( 5) : 17．
[9] 李孟津，杨希才，田波． 我国菊花褪绿斑驳类病毒鉴 定[J]． 微生物学报， 1987， 27( 2) : 121 - 127．
[10] 李世访，李明福，衣丰源． 菊花矮化类病毒两种检测方 法的建立与比较[J]． 植物保护， 2002， 28( 2) : 48 - 50．
[11] Kalantidis K，PsaRadakis S，TableR M T， et al． The occuRRence of Cmv-specific shoRt RNas in tRansgenic tobacco expRessing viRus-deRived double-stRanded RNA is indicative of Resistance to the viRus[J]． MoleculaR Plant-MicRobe InteRactions， 2002， 15( 8) : 826 - 833．
[12] Wang M B，Abbo R D C，WateRhouse P M． A single copy of a viRus-deRived tRansgene encoding haiRpin RNA gives immunity to baRley yellow dwaRf viRus[J]． MoleculaR Plant Pathology， 2000( 6) : 347 - 356．
[13] Missiou A，Kalantidis K，Boutla1 A，et al． GeneRation of tRansgenic potato plants highly Resistant to Potato ViRus Y ( PVY) thRough RNA silencing[J]． Mol BReed，2004， 14: 185 - 197．
[14] Hammond S M，BeRnstein E，Beach D， et al． An RNA-diRected nuclease mediates post-tRanscRiptional gene silencing in DRosophils cells[J]． NatuRe，2000，404: 293 - 296．
[15] Wesley S V，Helliwell C A，Smith N A， et al． ConstRuct design foR efficient，effective and high-thRoughput gene silencing in plants[J]． The Plant JouRnal， 2001， 27( 6) : 581 - 590．
[16] Sayaka H，Shin-ichiRo O，ERi A，et a1． The effects of spaceR sequences on silencing efficiency of plant RNAi vectoRs[J]． Plant Cell RepoRts，2007，26 ( 5 ) : 651 - 659．
[17] PRins M，de Haan P，Luyten R， et al． BRoad Resistance to tospoviRuses in tRansgenic tobacco plants expRessing thRee tospoviRal nucleopRotein gene sequences[J]． Mol Plant- MicRobe InteRact， 1995，8 : 85 - 91．
[18] Jan F J，Fagoaga C，Pang S Z， et al． A single chimeRic tRan sgene deRived fRom two distinct viRuses confeRs multi-viRus Resistance in tRan sgenic plan ts thRough homology- dependent gene silencing[J]． JouRnal of GeneRal ViRology， 2000， 81( 8) : 2103 - 2109．
[19] 白庆荣，朱俊华，刘晓玲，等． 利用RNA 介导的抗病性 获得抗2 种病毒的转基因烟草[J]． 植物病理学报， 2005， 35( 2) : 148 - 154．
[20] 张景景，高致明，张红瑞，等． 6 个栽培类型药用菊花 超氧化物歧化酶同工酶分析[J]． 河南农业科学， 2012， 41( 4) : 104 - 106．
[21] 张德富，蔡丽，王书丽，等． 植物抗病毒机制及抗病 毒基因工程策略研究进展[J]． 河南农业科学，2008 ( 11) : 18 - 24．
