植物生长过程中常常遭遇盐害、冷害、涝害、虫害、干旱等逆境胁迫。在自身突变和环境筛选的作用下，形成了生态系统的多样性和种群的多样性[1-3]。然而在开发利用盐碱地的过程中，人工辅助能的投入打破了原有的生态位，生产出更多社会需求的产品。花生作为中度耐盐作物，通过耐盐品种筛选[4]，大水压盐[5]，选择最佳播期、适宜密度[6]，施肥[7]等一系列措施使种植效益逐年提高，但是受降雨量分布不均、早春多风干旱、蒸发强烈等自然环境因素的影响[8]，致使盐分集聚表层土壤[9]，造成干旱和盐碱双重胁迫。以往关于花生非生物胁迫方面的研究大多集中在单一因素的逆境胁迫，有关旱盐双重胁迫对渗透调节物质及抗氧化酶活性影响的研究鲜有报道。因此，针对花生开花期是水分需求敏感时期且盐碱地花生开花期易遭遇阶段性干旱的现象[10]，本试验采用外源施加NaCl盆栽试验，模拟大田干旱和盐胁迫环境，以探究花生开花期盐胁迫对花生产量、渗透调节物质含量、抗氧化酶活性变化的影响，明确干旱与盐胁迫的交互效应，为盐碱地花生合理灌溉、高产、稳产提供理论指导。

1 材料和方法

1.1 试验材料

选择花生品种花育25号(HY25)为试验材料。供试土壤基本理化性质：土壤pH值7.7，土壤有机质含量13.23 g/kg，全磷(P2O5)0.84 g/kg，全钾(K2O)10.53 g/kg，全氮1.70 g/kg，水解氮(N)92.1 mg/kg，速效磷(P2O5)11.7 mg/kg，速效钾(K2O)103.2 mg/kg。

1.2 试验设计

试验于2015年在山东省花生研究所试验站防雨棚中进行，播种于同批次、同规格的塑料盆中。土壤采自山东省花生研究所试验站耕地表层土(0～20 cm)。土壤装盆前过筛，筛孔直径≤1 cm。充分混匀后每盆装土量为18 kg，土壤含水量为9.72%。采用裂区试验设计，主区为盐胁迫处理，设置2个水平，分别为耕层原土和盐胁迫处理(控制土壤含盐量0.3%)；副区为水分处理，水分胁迫程度按 Hsiao[11]的标准划分，反映土壤含水量占土壤最大持水量的百分数。设置2个水平，分别为中度干旱(45%田间最大持水量)和正常浇水(75%田间最大持水量)，详情见表1。当50%植株开花时(开花期)，盐胁迫处理以NaCl水溶液形式施入土壤，晾晒3 d后再进行干旱处理。土壤含水量控制采用称重法，持续胁迫10 d后复水，然后正常生长至收获。

1.3 样品采集与测定

1.3.1 样品采集 分别于干旱处理前(DAT0)、干旱处理后3 d(DAT3)、6 d(DAT6)、9 d(DAT9)、复水后第10 天(DAR10)上午9：00采取各处理植株的功能叶，液氮速冻后于-80 ℃超低温冰箱保存备用。

1.3.2 测定项目及方法 超氧化物歧化酶(SOD) 活性采用氮蓝四唑法测定[12]；过氧化物酶(POD)活性采用愈创木酚法测定[13]；过氧化氢酶(CAT)活性采用过氧化氢紫外线法测定[13]；MDA含量采用硫代巴比妥酸(TBA)法测定[14]；可溶性糖采用蒽酮比色法测定，可溶性蛋白质采用考马斯亮蓝比色法测定，茚三酮比色法测定脯氨酸含量，含量测定均根据李合生和赵世杰等[15-16]方法修改后进行测定。

1.3.3 荚果产量及产量构成因素 收获时考察农艺性状，包括单株结果数、单株荚果干质量、双仁果数等。在风干荚果中随机选取有经济价值的荚果计算双仁果率和出仁率。

1.4 数据处理

采用SPSS 19.0数据统计软件进行分析，并且对DAT9数据进行双因素方差分析，使用Origin 8.5作图。

2 结果与分析

2.1 干旱和盐胁迫对花生叶片SOD活性的影响

图1可见，随胁迫时间的延长，各处理SOD活性(以鲜质量计)变化趋势因胁迫类型的不同而不同。D处理叶片的SOD活性呈现单峰曲线式变化，峰值时较CK升高7.03%，差异显著，之后有小幅下降，DAR10时，与CK间差异不显著。S处理和DS处理的SOD活性随着胁迫时间的延长呈下降趋势，S处理降幅平稳，而DS处理在胁迫DAT3至DAT6时降幅高达30.35%，之后降幅降低，DAT9时，S处理和DS处理叶片的SOD活性分别为CK的80.06%，59.28%，各处理间差异均显著。DAR10时，DS处理叶片的SOD活性持续降低，但幅度减小，较CK和S处理分别降低45.35%和25.38%。干旱和盐胁迫对叶片SOD活性存在显著的交互作用(P=0.007)，旱盐互作加剧了盐胁迫对花生叶片SOD活性的抑制作用。

2.2 干旱和盐胁迫对花生叶片POD活性的影响

图2可见，随干旱胁迫时间的延长，各处理POD活性(以鲜质量计)变化趋势因胁迫类型的不同而不同。D处理叶片的POD活性变化较小，与CK差异不显著，受胁迫类型和强度影响较小，在DAT3和DAT9时略有降低，而S处理和DS处理的POD活性随着胁迫时间的延长均呈下降趋势，S处理降低缓慢，而DS处理在DAT3-DAT6时降幅较大，幅度为19.43%。在DAT3、DAT6、DAT9时，S和DS处理均与CK差异显著。 DAR10时，DS处理的POD活性持续下降，较CK和S处理分别降低47.03%，24.68%，处理间差异显著。复水未能使DS处理的POD活性恢复到S处理的水平，干旱与盐胁迫对POD活性存在显著交互作用(P=0.019)，旱盐交互抑制了花生叶片的POD活性，复水未解除对花生叶片POD活性的抑制作用。

2.3 干旱和盐胁迫对花生叶片CAT活性的影响

图3可见，随胁迫时间的延长，D处理叶片的CAT活性(以鲜质量计)呈单峰式变化趋势，峰值出现在DAT6时，较CK升高7.64%，差异显著，复水10 d后，CAT活性下降，较CK增加3.88%。S处理和DS处理随着胁迫时间的延长呈现下降的趋势。DAT9时，S处理和DS处理的CAT活性较CK分别降低10.57%和22.36%，差异显著。DAR10时，DS处理叶片的CAT活性较S处理降低36.66%，差异显著，干旱和盐胁迫存在显著交互作用(P=0.003)，旱盐交互加剧了对花生叶片CAT活性的抑制作用。

2.4 干旱和盐胁迫对和MDA的影响

由图4，5可见，随着胁迫时间的延长，除CK趋于稳定外，各胁迫处理和MDA的含量(以鲜质量计)均呈增加趋势。DAT9时，D处理和MDA含量较CK分别高出52.92%和12.60%，差异显著，复水后和MDA含量较复水前下降，DAR10时，与CK间差异不显著。DAT9时，S处理含量较CK高出52.97%，27.12%，DS处理较CK分别高出88.12%和56.49%，均差异显著。复水后DS处理的和MDA含量持续增加，DAR10时，与S处理差异显著，但是D处理与CK差异不显著，由此可见，非盐胁迫下，复水解除了干旱胁迫对花生生长的抑制作用，其干旱造成的损伤是可修复的，而旱盐双重胁迫下，干旱和盐胁迫存在显著的交互效应(P=0.048；P=0.029)，旱盐交互增加了花生叶片中和MDA的含量，旱盐互作对细胞膜的损伤可能是永久性的，复水未能解除干旱对花生生长的抑制作用。

2.5 干旱和盐胁迫对叶片渗透调节物质含量的影响

由图6可见，随干旱胁迫时间的延长，D处理、S处理和DS处理叶片中可溶性蛋白(SP)、脯氨酸(Pro)、游离氨基酸(AA)、可溶性糖(SS)的含量(以鲜质量计)均呈增加趋势。DAT0时，S处理Pro和AA的含量相较于SP和SS对盐胁迫响应更为敏感，与CK差异显著，花生遭遇S处理时首先通过增加叶片中Pro和AA的含量来降低自身水势。在DAT3时，除SS外，D处理叶片中SP、Pro、AA含量与CK均差异显著。DAR10时，D处理叶片中SP、Pro、AA、SS含量分别为CK的113.53%，105%，97.04%，104.15%，除SP外，SS、Pro、AA含量均与CK差异不显著，复水解除了干旱胁迫对花生生长渗透胁迫的危害程度；而DS处理的SP、Pro、SS含量较S处理高出14.52%，24.20%，11.82%，差异显著，复水未能降低DS处理下花生叶片中SP、Pro、AA、SS含量。双因素方差分析结果表明，干旱和盐胁迫对SP、Pro、AA、SS含量的影响无显著交互作用(P值均大于0.05)，干旱和盐胁迫均使花生叶片中渗透调节物质含量增加，但旱盐互作对花生叶片渗透调节物质的增加作用不显著。

2.6 干旱和盐胁迫对花生产量的影响

由表2可知，DS处理显著降低了花生的单株荚果数、双果仁率、单株产量和出仁率，DS处理的单株产量和出仁率较S分别降低19.63%和16.54个百分点，差异显著。相较于CK，D处理的单株产量降低2.74%，出仁率降低2.31个百分点，差异不显著。因此，盐胁迫下花生遭遇开花期短期干旱较非盐碱地遭遇短期干旱对花生产量、出仁率的危害更加严重。方差分析得出，干旱和盐胁迫对单株产量和出仁率均存在显著的交互效应(P分别为0.031和0.045)，旱盐互作加剧了DS处理对花生生长的危害，使单株产量和出仁率显著降低。

3 讨论与结论

植物遭遇逆境环境会发生一系列的生理生化反应来提高自身抗逆性。相关研究表明，盐胁迫对植物的危害主要通过离子胁迫和渗透胁迫[17-18]。盐胁迫下，土壤水势下降，植物通过增加可溶性糖、可溶性蛋白、脯氨酸等小分子溶质降低自身水势[19]，发挥渗透保护和渗透适应的作用[20-22]，从而提高叶片保水能力和根系吸水能力，但随着胁迫程度的增加或时间的持续，其调节能力超过阈值，植物吸水困难，细胞失水，自由基增多，过氧化产物大量累积，抗氧化保护酶系统被破坏，SOD、POD、CAT活性降低，活性氧(ROS)代谢加速膜脂过氧化链式反应[13]，MDA含量增加，损伤细胞，引起代谢紊乱[23]。本试验结果表明，盐胁迫条件下，花生通过增加叶片中SS、SP、Pro、AA含量降低叶片水势，以提高叶片的保水能力，而SOD、POD、CAT活性下降，和MDA含量增加，说明盐胁迫使得抗氧化酶保护系统破坏，MDA含量大量累积，细胞膜破坏严重。而干旱胁迫处理叶片SOD和CAT活性升高，和MDA含量增加但其增幅低于盐胁迫处理，说明干旱胁迫并未使花生叶片保护酶系统完全破坏。复水10 d后，干旱胁迫处理含量较复水前降低，除SP外，以上指标及SOD、POD活性与CK间差异不显著，说明复水可以解除干旱胁迫对植株生长和生理反应的抑制，使得收获期单株产量和出仁率与CK间差异并不显著，开花期短期中度干旱未造成明显的减产。干旱和盐胁迫都会导致土壤溶液的水势下降，致使植株吸水困难。适当的盐旱交叉胁迫，能够提高植物的抗逆境适应能力，碱蓬[24-27]、冬小麦[28]、玉米[29]中均得出类似的结论。但本试验结果表明：DS处理在复水10 d后，其CAT、SOD、POD活性持续降低，未能恢复到S处理水平，且处理间差异显著，同时和MDA含量与S处理间差异显著，说明DS处理对植株组织和器官的损伤已经超出了抗氧化酶系统的保护调节能力，旱盐交互作用加剧了对抗氧化酶系统的破坏作用，SOD、POD、CAT活性下降，和MDA含量增加，细胞膜过氧化作用损害严重，胁迫对植株的损害不可逆转。单株产量和出仁率能直接反映出逆境对花生植株的危害程度，DS处理较S处理分别降低19.63%和16.54个百分点。干旱和盐胁迫对单株产量和出仁率存在显著的交互作用，干旱加剧了盐胁迫对花生植株的危害，复水后干旱对盐胁迫下种植花生的危害未得到缓解，因此，盐碱地种植花生应及时补水，避免开花期干旱。

S处理降低了花生的SOD、POD、CAT活性，增加了可溶性蛋白、可溶性糖、脯氨酸、游离氨基酸含量。D处理使SOD和POD活性升高，通过增加渗透调节物质含量降低自身水势来提高自身抗逆性，复水解除胁迫后，未对单株产量和出仁率造成明显危害。干旱和盐胁迫对花生叶片SOD、POD、CAT活性存在显著交互作用，旱盐互作加剧了DS处理对花生的危害，降低了花生的单株产量和出仁率。因此，盐胁迫下种植花生，开花期遭遇干旱应及时灌溉，降低旱盐双重胁迫对植株的危害。

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